真菌(1_3)_β_D葡聚糖检测操作SOP文件.doc

真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定规范操作 1.目的 建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。 2.授权操作人 经培训合格的微生物实验室检验人员。 3.实验原理 （1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白， 根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。 4．产品性能指标 4.1 灵敏度 10pg/ml 4.2 精密度 批间 CV≤10% 。 4.3 准确性 回收率75-125%。 4.4 标准曲线相关系数 r绝对值≥0.980 5．实验组成 5.1实验仪器及器具： MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200μl加样器、100~1000μl加样器、旋涡混合器、定时器。 5.2实验耗材： 200μl无热原吸头、1000μl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。 5.3试剂盒组成： 真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）： 试剂盒包括反应主剂和样品处理液。 6．工作环境 相对湿度：20%~80%； 温度控制：10~30℃； 电源电压：220V±10%，50Hz±2%。 7．标本采集及保存 7. 1检测样本： 血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。 7.2采集要求： 采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。 常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。 7.3样本保存： 样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。 8．操作程序 8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。 8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。 8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。 8.4 取上述富含血小板血浆100μl，加入到样品处理液中，轻轻摇匀10秒后插入恒温仪加热区中进行70℃干热10min。 8.5干热结束后，将前处理液冷却5min，至室温后取出（取出时切忌震荡）。 8.6 取上述前处理液中上清液200μl加入到反应主剂中，轻轻混匀（一般混匀10秒即可），待完全溶解至透明后，全部移液至平底试管中(不要产生气泡)，立即插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行检测。 8.7 反应结束后仪器自动计算结果并保存。 待测血浆样品制备、检测示意图 9．操作注意事项 9.1预热采集 在进行试验之前，仪器一定要提前预热30min，达到工作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集，使仪器处于采集状态后再进行试验。 9.2 样本预处理 9.2.1 血液标本3000r/min离心1min。 9.2.2 取富含血小板血浆（离心后上层清液的中部）。 9.2.3 70℃加热时间严格控制在10min。 9.2.4 样本处理液加热冷却后，不要震荡以免将处理过的下层干扰物质悬浮上来。 9.2.5 取处理液的上清液。 9.2.6 加入主剂的200μl液体要全部转移至平底试管，转移过程中不能出现气泡。 9.2.7 平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。 10．结果判断与分析 检测值﹤10pg/ml,阴性。 检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。 检测值﹥20pg/ml，阳性，建议再次采血以确诊。 11．实验解释 本实验结果仅对本标本负责，提供给临床参考，请结合其他诊断方法和临床表现做综合诊断。 12. 特殊标本处理 对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2-5倍后进行检测。稀释步骤为：取100μl血浆标本加入到前处理液中，经过70℃干热并冷却后，再取225μl上述经处理后的标本加入到另外的一支900μl前处理液中，即得稀释5倍的待测标本（如需其他稀释倍数则按相应的比例进行），然后取200μl加入到反应主剂，溶解后全部转移至平底试管中插入仪器进行检测，注意需在检测软件中“稀释倍数”一栏填上稀释倍数，仪器会自动按照相应的稀释倍数计算结果。 备注：对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。 13．干扰因素 13.1产生的假阳性的原因有：应用纤维膜进行血液透析患者、某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖、某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖、某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症）。 13.2特殊真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-β-D 葡聚糖成分，隐球菌细胞壁外有荚膜致使（