iQ5校正标准流程.pdf

iQ5 Calibration Procedure 6-02-05. v1.3 Software Supported: iQ5 Version 1.0 Hardware Supported: Optics: iQ5 575BR XXXXX Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX 1 iQ™5 校正: 内容 何时需要进行校正 . . . 2 进行校正前的准备 进行校正的必备物品. . . .2 装配 校正前的准备. . . 3 标准流程 标准流程的小结. . . 4 具体的操作说明. . . 5 Mask. . . 5 Background. . . 6 Well Factors. . . 7 Pure Dyes. . . 8 各种校正后生成的文件. . . 10 文件的格式和命名方式. . . 10 文件的位置. . . 11 查看校正文件. . . 11 校正结果的评估. . .12 Masks. . . 12 Background. . . 12 Well Factors. . . 12 Pure Dyes. . . 13 RME Format. . . 13 Identifying Calibrated Fluorophores. . . 13 Fluorophore Reference Tables . . . 14 Using the iQ5 RME (Pure Dye) Decoder. . .15 Evaluating RMEs. . . 16 SYBR Green的校正. . . 17 多条 FAM探针的校正 . . . 17 iQ5中不正确的校正. . . 18 校正过程中需要的Consumable及货号 . . 19 iQ5 Calibration Procedure 6-02-05. v1.3 Software Supported: iQ5 Version 1.0 Hardware Supported: Optics: iQ5 575BR XXXXX Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX 2 何时需要进行校正: 在下列的情况下需对 iQ5进行校正: 1. 当 iQ5进行安装时. 2. 当光路系统的任一元件被更换的情况下. 这些元件包括: a. 灯 b. 滤光片 c. 光学热盖 d. 光学模块 e. CCD检测器 (需送回原产地维修) 3. 当原先控制 iQ5的 PC更换且原来的校正文件丢失的情况下.建议将校正文 件进行备份 (参见第 12页,校正文件的位置) 4. 当软件给出提示信息时. 背景校正因子和永久孔间校正因子的文件有效期为 30天,当软件在运行含有过期的背景校正因子和永久孔间校正因子文件时会 给出提示信息. 进行校正前的准备: 必须准备好下列的物品才能进行校正: 1. iCycler iQ Calibrator Dye Solution Set 2. iCycler iQ External Well Factor Solution (与iQ Calibrator Dye Solution Set 在一起) 3. 3块 96孔 PCR反应板或其他的 PCR耗材 4. QPCR专用封膜或其他封 PCR反应板的方法 进行校正时的 2个原则: 1. 进行校正时应采用的体积. 除了进行背景的校正外,进行其他所有的校正时 每孔采用的体积数必须和进行实验时采用的体积数一致. 2. 进行校正时采用的 PCR耗材. 所以的校正都需要在校正前确定特定的耗材 (包括 PCR反应管或板以及封膜). iQ5 Calibration Procedure 6-02-05. v1.3 Software Supported: iQ5 Version 1.0 Hardware Supported: Optics: iQ5 575BR XXXXX Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX 3 校正前 3块 96孔PCR反应板的准备: 准