王运平3_31修改后稿件整理.doc

不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的效果观察 ? 王运平a ，杨凯平b，孟德娇a，张伟强a，王晓丽a ，李世超a （武警总医院 a.急诊科；b.呼吸科，北京100039） [摘要] 目的 探讨不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的应用效果。方法 按冲洗剂量不同将脐带间充质干细胞制剂袋随机分为四组：A组60ml组（10例）、B组80ml组（10例）、C组100ml组（10例）、D组（10例）。每组分别于输注完后，采用不同剂量的生理盐水冲洗，并在光学显微镜下进行细胞计数，对四组残余细胞数进行统计学分析。结果 制剂袋内脐带间充质干细胞的密集度随着生理盐水冲洗剂量的增加而逐渐减少；A组制剂袋内细胞残余数（74400.00士3806.427）分别高于B组（26060.00士5436.339）、C组（9780.00士1265.614）及D组（9500.00士947.511），差异具有统计学意义（P0.05）；C组和D组冲洗后的干细胞残余数无显著差异（p0.05）。结论 静脉输注脐带间充质干细胞后，采用100ml生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋可能是最佳剂量。 [关键词] 生理盐水；冲洗；脐带间充质干细胞；制剂袋 由于间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)具有自我复制、 多向分化和免疫调控能力, 可应用于修复/替代受伤或病变的多种组织器官，从而为目前一些无法有效治愈的重大疾病如脊髓损伤、多发性硬化、老年性痴呆、帕金森氏症等提出了崭新的治疗方案[1]。人脐带间充质干细胞（human umbilical cord-derived mesenchymalstem cells，hUCMSC） 与其他组织来源的MSC相比，取材方便，免疫原性低，增殖分化能力旺盛，可塑性极强，因此，hUCMSC逐渐做为诱导分化的首选种子细胞，成为临床和科研工作中间充质干细胞的一个更佳来源[2]。间充质干细胞移植途径主要有腰椎穿刺、颅脑定位、球后注射、静脉输注等，其中静脉输注途径操作简单、创伤最小，可反复操作，病人易接受，越来越多的被应用于临床及科研[3]。但是由于间充质干细胞呈贴壁生长，具有较强的黏附性[4]，所以，当输注完毕会有相当一部分细胞附着在制剂袋内壁，有可能影响移植疗效，为了尽可能的将细胞输入人体，临床常采用生理盐水冲洗细胞制剂袋，但是到底需要多少剂量的生理盐水能够充分将细胞冲洗干净，目前国内外没有相关报道。故本研究目的是探讨不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的应用效果，寻找最佳的生理盐水冲洗剂量。 1 材料与方法 材料 奥林巴斯公司CX41型光学显微镜，北京凯弘电子仪器有限公司Qi3537型血细胞分类计数器 1.2方法 1.2.1 将脐带间充质干细胞制剂按照输液先后顺序采用计算机生成的随机数字随机分为A、B、C、D四组，每组10袋，四组于输注细胞后分别给予60ml、80ml、100ml、120ml生理盐水冲洗。由一名能够发现不足之处及问题所在的高年资护士[5]按静脉输液常规操作输注脐带间充质干细胞，为确保干细胞的活性，应尽快输入，开始速度宜慢，5分钟后患者无不适，可加快输注速度，输注过程中以每分钟120次的速度轻弹细胞悬液袋及输血器过滤网，通常于20分钟内输注完毕[6]。结束后每组脐带间充质干细胞制剂袋分别采用不同剂量生理盐水冲洗，尽量将悬液袋内壁残留细胞冲洗干净，然后每组再注入20ml生理盐水，混匀后从中取0.5ml注入EDTA（乙二铵四乙酸二钾）抗凝管混匀，从中取20ul手工计细胞数，利用光学显微镜观察并计数干细胞数目再换算成毫升数，即为该组冲洗细胞残余数量。 1.3 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计学分析。计量资料采用均数±标准差表示，四组制剂袋残余细胞比较采用方差分析，四组间两两比较采用t检验，P0.05表示差异有统计学意义。 2结果 2.1一般情况观察 用光学显微镜观察每个制剂袋残留细胞情况，结果发现，使用60 ml、80 ml、100 ml、120ml四个不同剂量的生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋后，制剂袋内脐带间充质干细胞的密集度随着生理盐水冲洗剂量的增加而逐渐减少。 2.2四组制剂袋生理盐水冲洗后残留细胞比较 A组、B组、C组、D组制剂袋内残留细胞数依次减少，四组比较具有统计学差异（F=806.713 P=0.001）；两组间比较除C组和D组两间比较没有统计学差异，其它两两比较均有统计学差异（P0.05）。见表1 表1. 四组间制剂袋残余细胞数比较（） 组别样本量残余细胞数A组1074400.00士3806.427B组1026060.00士5436.339*C组109780.00士1265.6