哺乳动物双杂交.pdf

CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统 产品 包装 目录号 价格 CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System 1 E2440 E2440 的组分 1×20ug pBIND Vector 1×20ug pACT Vector 1×20ug pBIND-Id Control Vector 1×20ug pACT-MyoD Control Vector 2×20ug pG5luc Vector 描述：双杂交系统是在体内检测蛋白-蛋白相互作用的极强有力方法。 双杂交系统的基础是在 一些转录因子上发现的模域(modular domains): 一个DNA结合域，它可以结合一段特异的DNA 序列，和一个转录激活域，这个转录激活域与基础转录机制相作用(1)。一个转录激活域联合一 个 DNA 结合域可能在 TATA 盒启动 RNA 聚合酶 II 复合体的装配，同时增强转录。在 CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统中，DNA 结合域和转录激活域分别由不同质粒产生，融合 于 DNA 结合域的一个蛋白质(“X)与融合于转录激活域的第二个蛋白质(“Y”)相互作用时， DNA 结合域就与转录激活域紧密关联。在这个系统中，蛋白 X 与 Y 的相互作用导致报告基因 的转录。 特点： ● 哺乳动物系统：可在所选细胞系中研究相互作用，蛋白质更可能处于其本来构型。更好地 保持了诸如糖基化、磷酸化和酰基化等翻译后的修饰。 ● 易于定量：Dual-Luciferase?双荧光素酶报告基因检测系统被用于检测。 ● 内对照：海肾荧光素酶使转染效率正态化。 ● 快速瞬时检测：转染后两天即可得到结果，而酵母系统则需 3-4 天。 ● 稳定转染：pACT 载体含有新霉素磷酸转移酶基因，可用于稳定转染的选择。 应用： ● 确认两个蛋白质有怀疑的相互作用关系，识别涉及蛋白：蛋白相互作用的域/残基。 操作指南： 技术手册： TM049 储存：存于-20℃。 参考文献 1．Sadowski， I.et al.(1998) Nature 335,563 Promega 公司荧光素酶技术系列产品指南 CheckMa pBIND-Id 和 pA 酶基因上游含有 报告基因检测系 和 MyoD 之间的Promega 公司荧光素酶技术系列产品指南 te™ 哺乳动物双杂交系统中蛋白：蛋白相互作用正对照反应的概略图示。在正对照反应中， CT-MyoD 对照载体与 pG5luc 载体一起共同转染哺乳动物细胞。载体 pG5luc 的萤火虫荧光素 在基本 TATA 盒上游的 5 个 GAL4 结合位点。细胞温育 2-3 天，裂解，然后用 Dual-Luciferase® 统检测萤火虫和海肾荧光素酶。在正对照实验中，在 GAL-4Id 和 VP16-MyoD 上融合的蛋白 Id 相互作用导致载体 pG5 luc 上的荧光素酶的高水平表达。