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哺乳动物双杂交.pdf
CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统
产品 包装 目录号 价格
CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid
System
1 E2440
E2440 的组分
1×20ug pBIND Vector
1×20ug pACT Vector
1×20ug pBIND-Id Control Vector
1×20ug pACT-MyoD Control Vector
2×20ug pG5luc Vector
描述:双杂交系统是在体内检测蛋白-蛋白相互作用的极强有力方法。 双杂交系统的基础是在
一些转录因子上发现的模域(modular domains): 一个DNA结合域,它可以结合一段特异的DNA
序列,和一个转录激活域,这个转录激活域与基础转录机制相作用(1)。一个转录激活域联合一
个 DNA 结合域可能在 TATA 盒启动 RNA 聚合酶 II 复合体的装配,同时增强转录。在
CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统中,DNA 结合域和转录激活域分别由不同质粒产生,融合
于 DNA 结合域的一个蛋白质(“X)与融合于转录激活域的第二个蛋白质(“Y”)相互作用时,
DNA 结合域就与转录激活域紧密关联。在这个系统中,蛋白 X 与 Y 的相互作用导致报告基因
的转录。
特点:
● 哺乳动物系统:可在所选细胞系中研究相互作用,蛋白质更可能处于其本来构型。更好地
保持了诸如糖基化、磷酸化和酰基化等翻译后的修饰。
● 易于定量:Dual-Luciferase?双荧光素酶报告基因检测系统被用于检测。
● 内对照:海肾荧光素酶使转染效率正态化。
● 快速瞬时检测:转染后两天即可得到结果,而酵母系统则需 3-4 天。
● 稳定转染:pACT 载体含有新霉素磷酸转移酶基因,可用于稳定转染的选择。
应用:
● 确认两个蛋白质有怀疑的相互作用关系,识别涉及蛋白:蛋白相互作用的域/残基。
操作指南:
技术手册: TM049
储存:存于-20℃。
参考文献
1.Sadowski, I.et al.(1998) Nature 335,563
Promega 公司荧光素酶技术系列产品指南
CheckMa
pBIND-Id 和 pA
酶基因上游含有
报告基因检测系
和 MyoD 之间的Promega 公司荧光素酶技术系列产品指南
te™ 哺乳动物双杂交系统中蛋白:蛋白相互作用正对照反应的概略图示。在正对照反应中,
CT-MyoD 对照载体与 pG5luc 载体一起共同转染哺乳动物细胞。载体 pG5luc 的萤火虫荧光素
在基本 TATA 盒上游的 5 个 GAL4 结合位点。细胞温育 2-3 天,裂解,然后用 Dual-Luciferase®
统检测萤火虫和海肾荧光素酶。在正对照实验中,在 GAL-4Id 和 VP16-MyoD 上融合的蛋白 Id
相互作用导致载体 pG5 luc 上的荧光素酶的高水平表达。
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