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《食品毒理学》实验指导
综合实验 (四氯化碳)对肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)
的影响实验
实验一 半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期
实验二 血液红细胞、白细胞计数
*所需实验仪器:电子天平、pH计(试纸)、显微镜、分光光度计、灌胃针头、(小)/(大)离心机、注射器。
实验一 半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期
一、原理、目的
药物血浆半衰期t1/2即血浆药物浓度下降一半所需的时间。绝大多数药物是按一级动力学规律消除(恒比消除),因此每种药物都有固定的t1/2,不因血浆浓度高低而改变。本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并计算t1/2。水杨酸钠为抗炎药,经肝代谢,在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物,在520nm波长下比色,其光密度与水杨酸??度成正比。
通过测定水杨酸钠的血浆半衰期,使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度,并掌握其血浆半衰期的测定方法。半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数,对中毒和解毒有一定的实践意义。
二、试剂、器材及动物
离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计;三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁;兔。
三、方法步骤
1、取离心管和试管各5支,分别标为1~5号,备用。5支离心管各加入10%三氯醋酸7ml。
2、取兔1只,称体重,从耳静脉取血2ml置入1号离心管,用玻璃棒搅拌。然而自耳静脉注入10%水杨酸钠 (剂量为150mg/kg),并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml,分别注入2、3号离心管中,搅拌。4、5号离心管分别加入蒸馏水和0.02%水杨酸钠2ml。
3、取上述5支离心管进行离心 (2 000r/min,5min),准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中,分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6m1)摇匀5min后比色。
4、用721型分光光度计510nm波长比色,以4号管调“0”,读得5号管光密度为x,再以1号管调“0”,读得2号管为x1,3号管为x2,将上述操作归纳为下表:
水杨酸钠血浆半衰期的测定
试管名编号三氯醋酸
(ml)兔血
(ml)0.02%水杨酸钠
(ml)蒸馏水
(ml)离心上清液
(ml)三氯化铁
(gtt)对照172——612立即272——61260min372——612空白47——2612标准57—2—612
5、计算半衰期
① 求k值:k=y/x; y=0.02
② 求水杨酸钠血浓度:给药后立即血浓度y1=kx l;给药后60min血浓度y2=kx2 。
③ 根据下列公式求半衰期:
0.301
(lgy1 - lgy2) / t
t1/2 =
四、结果
结果测定
5号管光密度(x)2号管光密度(x1)3号管光密度(x2)t1/2
实验二 血液红细胞、白细胞计数
A【红细胞计数】
红细胞计数(red blood cell count,RBC)是指计算每升血液内所含红细胞的数目。红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比色法、血细胞电子计数器计数法等。目前在临床上使用最广泛的是显微镜计数法(计数板法)。
一、原理
血液经稀释后,充入血细胞计数板,用显微镜观察,计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目。
二、器材
1、改良式血细胞计数板:临床上最常用的是改良纽巴(Neubauer)氏计数板,它是由一块特制的玻璃板构成,玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台,两边的平台较中间的平台高0.1mm。中央平台又有一纵沟相隔,其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格,每一大方格面积为1.0mm2,深度为0.1mm;四角每一大方格划分为16个中方格,为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格,每个中方格又划分为16个小方格,共计400个小方格,此为红细胞计数之用。
2、血盖片:专用于计数板的盖玻片呈长方形,厚度为0.4mm。
3、沙利氏(shali)吸血管或红细胞稀释管,5ml吸管、中试管。
4、显微镜,计数器等。
5、稀释液:0.85%氯化钠溶液。
三、方法
试管稀释法
用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml(或4ml亦可)置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处(或吸血至刻度10处,红细胞稀释液用2ml)。擦去吸管外壁多余的血液,将此血液吹入试管底部,再吸、吹数次,以洗出沙利氏管内粘附的血细胞,然后试管口加塞,颠倒混合数次,再用毛细吸管(或玻棒)吸取已稀释好的血液,放于计数室与盖玻片接触处,即可自然流入计数室中。注意充液
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