疟疾镜检是.ppt

疟原虫镜检技术;一、显微镜镜检用于疟疾诊断; 1. 所需设备 （1）载玻片 （2）采血针 （3） 玻片盒 （4） 75％乙醇棉球 （5） 铅笔 （6） 登记表 ; 2．血片制作 （1）取血部位 采血部位有指尖、耳垂、婴儿可在足跟取血 （2） 涂制血膜 厚血膜的涂制： ; 用棉球抹净角上的血渍，再刮取血液1.5μl{约1/4火柴头大小)，将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25-35°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，长约2.5CM。 ;（3）厚薄血膜的位置： 每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。 （4）血膜的编号 制成血片后，待薄血膜干后用铅笔将代号或个人编号写于血膜基部，编号要与登记本及结果报告单上的编号相一致，以防差错。 ; 标准血膜示意图 ;（二）血片的染色 1．薄血膜??固定 血片完全干燥后才可染色 固定的方法： 将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固定薄血膜。 （注意：厚血膜不能固定）;2． 染色用水和冲洗用水配制 常用中性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。用pH7.0～pH7.2的缓冲液效果最佳。在没有蒸馏水的情况下，也可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。 （1）两种贮备液的配制： 贮备液I 1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液 Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 （KH2PO4 ）溶液 KH2PO4 9.07 g 蒸馏水 1000 ml;（2）缓冲液的配制 PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4 DW (ml) ( ml) (ml) 6.8 49 51 900 7.0 63 37 900 7.1 68 32 900 7.2 73 27 900 7.4 81 19 900 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂;（1）配制吉姆萨（Giemsa）染液： 吉姆萨粉 10g ? 甲醇 500ml ? 甘油 500ml ? 将吉姆萨粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇洗涤掉剩余部分并倒入瓶内，重复数次，一并倒入瓶中，至研钵中甘油洗净为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，在室温下放置3-5天，每天摇动，即可使用。放置时间越长染色效果愈佳。 ;（2）??? 染色方法： ? A. 常规染色 用PH7.0-7.2缓冲液或蒸馏水将吉氏原液与缓冲液1：20稀释。 分别加数滴经稀释吉氏染液于厚、薄血膜，染色25-30分钟后，用中性蒸馏水轻轻将片上的染液冲去，（冲洗时勿用水直接对准厚血膜，以免血膜脱落）凉干后镜检。; B.??? 快速吉氏染色 在每毫升缓冲液中加吉氏原液3滴，（10-15%吉氏染液）分别加数滴于厚、薄血膜上，染色5分钟，用流水轻轻冲洗干净，凉干后镜检。 ;瑞氏（Wright）染液: （1）染液配制： 瑞氏染剂粉 0.1—0.5g 甘油 3ml 纯甲醇 97 ml 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒入