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第三章真菌感染实验诊断;一、真菌的形态特性;菌丝和孢子的形态因菌而异,是鉴定
真菌的重要依据。孢子又分为多种,
如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子
等。
; 二、真菌菌落特性;1.酵母型菌落 是单细胞真菌的菌
落,形态与细菌菌落相似,较大,
表面光滑湿润柔软、边缘整齐,
如新生隐球菌。
;2. 类酵母型菌落 如白假丝酵母菌,
形成假菌丝,伸人培养基中。;3.霉菌型菌落 是多细胞真菌的菌
落。菌落呈棉絮状、绒毛状,并
产生不同的色素,如皮肤癣菌。
;第二节 标本采集及检验程序;2.各种分泌物和排泄物:生殖道
分泌物、耳垢、痰、粪便、尿
液等。 ;3.血液和体液:体液包括胸水、
腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。
4.脓汁及渗出物。
;(二)采集标本注意事项;2.在用药前采集标本 一般真菌
标本须在用药前采集,对已用
???者则需停药一段时间后再采
集标本。;3.采集的标本量要足 血液和脑
脊液标本5ml,胸腔液20ml,
皮屑标本两块,活体组织两份
(一份送病理科检查,一份作
镜检和培养)。
;4.严格无菌操作 并进行消毒处理,
尤其是采集血液和脑脊液标本,
要避免污染杂菌。
5.采集标本立即送检 深部真菌标
本最长不得超过2h。
;第三节 真菌检验;直接镜检的意义;③判断某些真菌种的致病性等,如
皮肤癣菌、曲霉等。;直接镜检也有局限性:
①阴性结果不能排除真菌感染;
②有假阳性结果。
因此,对直接镜检可疑结果应
作复查或用其他检验方法鉴定。
;(二)抗原检测; 用胶乳凝集试验检测标本中的白
假丝酵母菌甘露聚糖抗原。
用胶乳凝集试验和ELISA检测血
清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗
原,在治疗前检测非常敏感特异。; 用半定量放射免疫法检测血清、
尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循
环多糖抗原,可快速诊断。
;二、真菌的分离培养;①菌落性质:酵母菌还是霉菌;
②菌落大小,病原性真菌菌落小,
而条件致病性真菌菌落大;;③菌落颜色 病原性真菌颜色淡,
污染真菌颜色深;
④致病性真菌菌落下沉,有时使
培养基开裂;污染性真菌菌落
不下沉,很少引起开裂。
;三、真菌的生化反应;2.同化碳源试验 含菌生理盐水
与已融化的固体同化碳源培养
基(45℃)混合,然后在培养基
上分别加糖,置25℃孵育观察
结果。若24h后无变化可重复
加糖。如能同化周围有生长圈,
否则无生长。 ;3.同化氮源试验 同化碳源试
验相同,但需用无氮源的培
养基,不要加糖类,而加入
硝酸钾。
;四、动物实验;五、核酸检测 ;(一)G+Cmol%分类鉴定法;(二)真菌核型的脉冲电泳分析;原理:PFGE有两个方向的电场在设
定的脉冲时间里交替变换,使大分
子DNA在移动中不断改变自己的形状
及迁移方向,从而绕过细小的凝胶
孔隙而得以分离。较大的DNA分子泳
动慢些,较小的快些,有许多因素影
响电泳带型,分离真菌等大分子量的
DNA宜用较低电压和较长脉冲时间。;用PFGE分析真菌核型,可直接比较
其遗传背景,从电泳核型差异中进行
分类鉴定,又能取得基因结构的基本
数据,构建出大尺度物理图谱。
;(三)随机扩增多态性 DNA(RAPD)分析;六、真菌毒素的检测;检测真菌毒素有许多方法,如检测
黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法
等。生物学方法主要用于检测真菌
毒素的毒性,如用鸡胚、小??鼠作
毒性试验,观察动物中毒死亡或出
现肿瘤。ELISA法操作简便,并具有
安全快速高效、费用低,适用于大
批量标本的筛选。
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