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第三章 细胞工程基本技术;一、细胞工程实验室的设置 1 动物细胞工程实验室的设置 无菌操作室：更衣间、缓冲间、操作间 培养观察室 制备室 储藏室 清洗与灭菌室 ;2 植物细胞工程实验室的设置 除与动物细胞工程实验室相同的设置外，还有些特殊要求，如光照、试管苗培育和移植驯化等。;二、常用仪器与设备;细胞记数板和电子细胞记数仪 过滤除菌装置 离心机 移液管、吸管 离心管 移液器 天平 ;动物细胞工程实验室基本设备仪器;4 细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮罐-196℃）;植物细胞工程实验室基本设备仪器;三、实验室的生物安全;四、培养用品的清洗;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;1、玻璃用品的清洗 在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求???净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。 一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。 ;① 浸泡 初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃器皿多附有大量蛋白质，用完后应立即初步刷洗，浸泡在蒸馏水中，注意让水完全进入瓶皿中，不要留有气泡。使用新的器皿应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸(5％)浸泡过夜或煮沸30分钟，中和其中的碱性物质后再清洗。 ② 刷洗 浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加热）刷洗。 ;③ 浸酸 刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关键环节。清洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水按一定比例配制而成。浸泡时器皿要充满洗液，不留气泡。浸泡时间不应少于6小时，一般应浸泡过夜。 ;清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种： 强液：重铬酸钾63g，浓硫酸1000ml，蒸馏水200ml 次强液：重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml 弱液：重铬酸钾l00g，浓硫酸l00ml，蒸馏水1000ml 配制时先将重铬酸钾完全溶解于水，然后缓慢加入浓硫酸。 新配制的清洁液为棕红色，经多次使用，水份增多或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示清洁液已失效，应废弃而重新配置。 也可以使用10％～40％的硝酸溶液。 ;④ 冲洗 玻璃器皿浸酸后必须用流水充分冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复十次以上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗2~3次，用双蒸水漂洗1次，烤干备用。 玻璃滤器原则上与玻璃器皿清洗相同。无论是浸泡还是浸酸、冲洗，都需用抽滤的方法。;2、橡塞清洗 新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗。胶塞类橡胶用品，每次用后先用蒸馏水浸泡，然后用2％NaOH煮沸10-20 min，用自来水冲洗干净，再用1％稀盐酸浸泡30min，用自来水冲洗、蒸馏水漂洗2-3次，最后双蒸或三蒸水漂洗1次，晾干后备用。;3、塑料器皿的清洗 细胞培养使用的塑料器皿主要有培养板、培养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次性商品，己消毒灭菌，打开就可使用。 如想反复使用，清洗方法如下：用后立即用流水清洗或浸泡在水中，用脱脂棉清拭掉残留附着物，用2％NaOH浸泡过夜，流水冲净后再用5％盐酸浸泡30min，自来水冲洗、蒸馏水漂洗2~3次，最后三蒸水漂洗2次，晾干备用。 ;五、消毒灭菌;（一）物理灭菌法 1、紫外线消毒 常用来消毒空气，操作表面和一些不能用其它方法消毒的物品(如塑料培养皿等)。一般距紫外灯2.5米范围内直接照射20分钟即可。 ２、电离辐射消毒 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过的用品。 ;３、湿热灭菌 湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和最有效的一种方法。布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液都可用此法消毒灭菌。 各种物品有效消毒灭菌压力和时间不同，一般培养用液、橡胶制品要求10磅(114℃)，10～20分钟或8磅(112℃)30分钟。布类、玻璃制品、金属器械等为15磅(12l℃)20分钟。 。 ;４、干热灭菌 　主要适用于玻璃器皿的消毒灭菌。用电热鼓风干燥箱加温到160℃，保持1小时或更长时间，可达到消毒目的。金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热消毒法。 灼烧