第三讲 技术方法(一)是.ppt

第三讲 环境生物技术研究方法;第一节 传统微生物分析方法;第一节 传统微生物分析方法;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;1mm;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;二. 平板计数法;菌落总数：指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的微生物菌落总数。 菌落总数并不表示实际中的所有微生物总数，菌落总数并不能区分其中微生物的种类，所以有时被称为杂菌数。 ; 操作程序 首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散开来，使成单个细胞存在，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经过培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 ; 平板倾注法 先把适量稀释液(1mL)移进灭菌培养品，再倒入已融化并冷却至45～50℃的培养基，轻轻转动平板，使稀释液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，适温培养。 平板表面涂布法 先将融化的培养基凝固，再移入适量稀释液（0.2mL），然后用涂布刀涂布于整个平板的表面，放置片刻(约l0min)，将平板翻转,适温培养。; 平板表面点滴法 与涂布法相似，用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025mL)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域)，每个区域滴1滴，每个稀释度滴两个区域，作为平行试验。滴加后，将平板放平片刻(约5～10min)，然后翻转平板，适温培养。 ;主要工具;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;细菌:牛肉膏蛋白胨培养基;放线菌:改良高氏1号培养基;真菌:马丁培养基;通常情况下的稀释度 细菌：10-4~10-6 真菌：10-1 ~ 10-3 放线菌：10-3 ~ 10-5; 注意事项 （1）样品稀释时尽量使样品中的微生物细胞分散开，以单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞） （2）接种量要准确 （3）涂布要均匀;三. 最大或然数法（MPN）;最??或然数(most?probable?number，MPN) 计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。;将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lmL）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值.;10-2;稀释度;544; ;结果计算： 每个干土中菌数= 近似值?数量指标第一位数稀释倍数 干土% ;;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; 适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群 特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度 适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等);注意 （1）菌液稀释度要合适。原则是最低稀释度的所有重复都应有菌生长，而最高稀释度的所有重复无菌生长。 （2）每个接种稀释度必须有重复，重复次数可根据需要和条件而定，一般3—5个重复，但重复次数越多，误差就会越小，相对地说结果就会越正确。;四. 微生物生物量碳 氯仿熏蒸培养法、氯仿熏蒸浸提法（去乙醇氯仿）; 培养时间过长，不适合快速测定 不适合强酸性土壤的测定 不适合风干土 不适合添加有新鲜有机质的土壤;原理：土壤经氯仿熏蒸处理，微生物被杀死，细胞