细胞工程2培养细胞常规检是查和特性鉴定.ppt

C;第一章 　绪论 4个学时第二章 　实验室配置及基本技术 2个学时第三章 植物细胞工程的理论基础 4个学时　第四章 　植物组织器官培养技术 6个学时第五章 　植物细胞培养及次生代谢产物生产 3个学时第六章 　原生质体培养和体细胞杂交 3个学时第七章 　人工种子及植物种质资源保存 2个学时 第八章　　胚胎干细胞培养 2个学时 第九章　　动物细胞培养　　　　　 4个学时第十章　　动物细胞融合与单克隆抗体 4个学时　　　第十一章　动物组织与胚胎工程 1个学时　　　　　　第十二章　试管动物与克隆动物 1个学时;; 第三节 培养细胞常规检查和特性鉴定;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;常见微生物污染。微生物污染包括细菌、酵母菌、霉菌和病毒污染。无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等是主要污染源。严格之无菌操作技术、清洁的环境以及品质良好之细胞来源和培养基严格无菌配制是减低污染之最好方法。 ;;;;;;;支原体污染 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间（最小直径0.2um）并独立生活的微生物。约有1％可通过滤菌器。无细胞壁，形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形，在光镜下不易看清内部结构。 支原体污染以后多吸附或散在分布于细胞表面和细胞之间。培养液可不发生混浊，多数情况下，细胞病理变化轻微且可由于传代、换液而缓解，易被忽视；个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养皿脱落。 确定有无支原体污染可做如下检测：相差显微镜检测、荧光染色法、电镜检查、DNA分子杂交检查等。 ;;细胞系特征及细胞系间交叉污染的测定;;;;;;;;;细胞冻存方法;;;;液氮罐;;冷冻储存运输：利用特殊容器盛液氮或干冰保存。效果好但麻烦。 充液法：选生长至1/3～1/2瓶底壁、生长状态好的细胞，弃掉旧培养液，补充新培养液至瓶颈，留微量空气，封口膜封口。贴身携带，达目的地后倒掉多余培养液，次日换液。; 第五节 细胞同步化;;M期细胞的分离： M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。 －优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物的伤害。 －缺点：获得细胞数量少（分裂细胞约占1%～2%）;; 采用低毒或无毒的DNA合成抑制剂特异地抑制DNA合成，而不影响处于其他时期细胞进行细胞周期运转，从而将被抑制的细胞抑制在DNA合成期的实验方法。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度AdR、GdR和TdR均可抑制DNA合成使细胞同步化。其中高浓度TDR对S期细胞毒性较小，因此常用TdR双阻断法诱导细胞同步化。 －优点是同步化程度高，适用于任何培养体系。可将几乎所有的细胞同步化。 －缺点是产生非均衡生长，个别细胞体积增大。 ;;TdR双阻断法进行细胞同步化; 利用抑制微管聚合的药物将细胞阻断在细胞分裂中期。常用的药物有秋水仙素和秋水仙酰胺，后者毒性较少。 －优点是操作简便，效率高，无非均衡生长现象。 －缺点是药物处理时间过长，所得到的细胞常不能恢复正常细胞周期运转。 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.