血凝操作规程是.doc

血 凝 项 目 标 准 操 作 规 程 一般注意事项 1.1样品采集 ● 静脉抽血； 穿刺要一针见血，避免淤血，气泡，溶血和组织液污染； 如果使用真空采集管，以第二或第三管样品为佳； 如果从导管取样，则需用生理盐水冲洗管道，前面5ml血不能使用； 采血后立即与抗凝剂充分混合，尽快送往实验室； 采血量必须准确，如果少于计划量的90%，则不能使用； 不能在静脉穿刺部位或附近部位采样。 1.2样品处理 使用3.8%或3.2%(W/V)枸橼酸钠溶液作为抗凝剂； 血样与抗凝剂的比例为9：1，如果血球压积﹤20%或﹥55%，则需调整这个比例， 方法是：0.00815X血液毫升数X(100-压积)=抗凝剂毫升数； 血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）； ——采样后60分钟内进行； ——离心速度为1000g/10分钟 盛血浆容器应加塞，防止PH改变； 血浆应保存在2-8℃； 血浆存放时间不能太久； 温度有效时间室温≤2 hr2-8℃≤4hr-20℃≤2weeks-70℃≤6months 低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。 与样品接触的所有器材（注射剂，样品管，检测杯等）必须采用塑料袋或硅化玻璃材质。 全部器材均不得含去污剂或清洗液。 1.3影响测定结果的几种因素 抗凝剂：草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂； 黄疸，脂血，重度溶血和冰冻血浆影响测定结果不准； 使用纤溶药物，如双香豆素，链激酶，尿酶等可使凝固时间延长； 超过治疗试剂量的肝素使凝固时间延长； FDP增加使凝固时间延长； 某些药物，如口服避孕药，雌激素，天门冬酰胺酶，钠络酮等影响测试结果； 样本采集和处理不当，都会使凝固时间缩短或延长； 妊娠和急性炎症会影响某些测试结果。 1.4干粉试剂及血浆溶解 保证干粉完全溶解； 溶解时，轻轻转动容器，避免剧烈震荡； 确认溶剂种类，一般溶解液包括：蒸馏水/生理盐水/缓冲液/厂家特定溶解液，按说明书选择； 复溶后，室温放置5-10分钟后方可使用 二．具体项目操作注意事项 1.PT凝血酶原时间 I. 概述 凝血酶原时间(Prothrombin Time)测定用来作为外科手术前对某一凝血因子的评价，以及用于监视抗凝治疗，当进行凝血酶原时间测试时，对于正常结果需有2、3级所有因子。因此，该实验对因子I、II、V、VII和X的量减少或不足是很灵敏的。 除了因子IX，凝血酶原时间测试对于其它所有因子缺乏是灵敏的，它已被证明在监视抗凝治疗是有效手段。 凝血酶原时间测定也用于因子II、V、VII和X的定量分析(因子分析)。 II. 试剂 干粉试剂需复溶，液体试剂直接使用，使用前轻轻混合，可使用一些备件如搅拌。使用期间保持适当的悬浮液状态。如质控结果在范围之外，或试剂颜色发生变化，可能表明产品变质。然而，差的性能、结果也可能是由于其他因素包括试验系统引起的。 警告：PT-DS试剂含有叠氮钠，勿服、勿接触皮肤和黏膜。 III. 样本收集 3.8%(0.109M)枸橼钠做为抗凝剂。避免溶血和其他组织液的污染。样本体积不得少于所需体积的90%。在3000×g下离心10分钟，如样本在22—24℃下，须在2小时内测定。有关样本收集和储存的详细资料，请参见NCCLS文件。 IV. 步骤 提供材料PT试剂 另需材料： ① 纯化水 ② 合适的计时器 ③ 精密移液管：0.1ml和0.2ml ④ 正常和异常质控物，（凝血质控血浆三个水平) PT适合于手工、仪器、光度计和其它凝固的测定方法。 手工方法 A：在37℃预热PT试剂； B：加0.1ml血浆到比色杯中，在37℃下预热； C: 用力加0.2ml预热的PT试剂到血浆中凝结形成，并记录时间建议至少使用一正常和一异常对照血浆，每40份病人样品至少一次轮换，逐日测定对照血浆，建议每个实验室应做好室内质控范围。 V. 结果 用最近的0.1秒报告每个血浆的凝固时间，所得PT时间结果与正常参考范围值一起列入报告。(勿报告相对于商业质控血浆凝结时间的病人比值。质控仅仅是为了保证试验系统的准确性。) VI. 局限性 血凝生物化学包含一系列受许多预试验条件影响的反应。这些变异性必须被控制，以获得好的结果： 样本收集 勿延迟血液与抗凝剂的混合； 避免样本产生泡沫； 用塑料或硅硼酸盐玻璃容器； 混浊、溶血、脂血或黄疸的样本，可能会引起错误结果； 冷冻和解冻包含残留细胞血浆，会裂解细胞膜而影响结果； 急性炎症反应由于纤维蛋白原的升高，会缩短PT结果； 红细胞压积在20—55%范围以外，所加抗凝剂需调整比例。 技术： 如果血浆暴露到空气中pH将升高； PT工作要求37℃±0.5℃。经常检查加热部分的温度。在4—8℃保持的血浆可能会引起