鸡胚接种技术是.ppt

第二章 鸡胚接种技术;一、概况; 鸡胚培养法的优点： 鸡胚的组织分化程度低，可选择适当途径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体含大量病毒。 鸡胚是一整体，有神经血管的分布及脏器的构造。 来源充足，操作简单，通常是无菌的，对接种的病毒不产生抗体。; 鸡胚培养法的缺点： 一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递到鸡胚。 通常鸡胚含有白血病病毒。 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。;第一节 鸡胚的结构与生理;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;卵壳与壳膜 卵壳位于最外层的坚硬壳层； 壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子 交换，因此培养鸡胚需一定的湿度和气体。 气室 功能主要是呼吸和调节压力。 绒毛尿囊膜 壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官。 羊膜 胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。;尿囊腔 位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。 卵黄囊 主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养。 卵白 外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养。;第二节 鸡胚的孵育和检查;鸡胚的孵育 — 温度为38～39℃； — 湿度为40％-70％； — 翻蛋：防止蛋白粘连，促进羊膜运动和空 气流通； — 通风：排出CO2和吸入O2。; 检卵 — 血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血 管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 — 胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在 转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎 发红像出血样，有的呈现黑块。 — 绒毛尿囊膜发育界限：发育好的鸡胚可见 密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜， 死胚则见不到这一现象。 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;第三节 鸡胚接种途径及方法;接种步骤与方法;羊膜腔接种法 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;解剖与收获;（二）绒毛尿囊膜接种;将孵育l0~13日龄的鸡胚标记气室、胎位，于与胚胎略近气室端卵壳上划一等边三角形。 消毒气室顶端及记号处，用开孔器在记号处的卵壳上开一三角形裂痕，不可弄破下面的壳膜，同时在气室顶端钻一小孔。 轻轻揭去卵壳，露出壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖循卵壳膜纤维方向划破一隙，勿伤及紧贴的绒毛尿囊膜。 用针尖刺破气室小孔处的壳膜，再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸气，此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上，从而使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室。 在卵壳的窗口滴0.05~0.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将旋转鸡胚使接种物扩散到整个绒毛膜尿囊膜上。 在卵壳的窗口周围涂石蜡，用消毒胶布封口。将鸡胚保持人工气室在上的位置，33~35℃继续培养48～72h。;绒毛尿囊膜接种法;解剖与收获;（三）尿囊腔接种;取9~11日龄的鸡胚，标记气室与胚胎位置，并在胚胎面与气室交界之边缘上约1mm处避开血管作一标记，此即为注射点。 将鸡胚竖放在卵杯上，钝端向上。消毒气室的蛋壳，用开孔器钻开一长约2mm小口。 再次消毒钻孔区，接种病毒液0.1～0.2ml，将针头刺入孔内，经尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。 消毒后用石蜡溶化封孔，于33～35℃孵卵器孵育48～72h，；于接种后24h内死亡者为非特异性死胚应弃去。;尿囊腔接种法;解剖与收获;（四）卵黄囊接种;取5～8日龄鸡胚，标记气室和胚胎位置，垂直放置在卵架上，钝端朝上，消毒气室端。 用开孔器在气室中央的卵壳上钻一小孔，用带有6号针头的1m1注射器将样品从小孔处沿胚的纵轴迅速刺入约3cm，注入0.2～0.5ml待接种的病毒于卵黄囊内，随后用胶带或溶化的石蜡封孔。 置孵化箱内继续孵育3～8d，时间长短应根据病毒或立克次体的种类而定，每天翻卵2次，弃掉24h内死亡的鸡胚(但东方型和西方型马脑炎可能在接种后15～24h内死亡)。;卵黄囊接种法;解剖与收获;Ev