Folin酚测蛋暗淖质含量实验报告.doc

PAGE \* MERGEFORMAT6 生物化学实验报告 姓 名： 学 号： 专业年级： 2014级生物信息学 组 别： 第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 FORMTEXT
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验日期2015-11-2实验地点第8实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的 1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。 2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。 3.熟悉分光光度计的用法。 二、实验原理 1.在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。 2.蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残??还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。 3. 在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。 三、材料与方法 1.实验材料 （1）样品 健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L （2）试剂 牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液（现配现用）；Folin-酚试剂 （3）仪器与器材 V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标纸 2.实验步骤 （1）图示 （2）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1作空白对照，2-5作标准，6为待测样品） （3）加样时按横向顺序加样，并在加入碱性硫酸铜时：于1号试管加入碱性硫酸铜溶液2ml后等待1分钟再往下一支试管加入等量的碱性硫酸铜溶液，摇匀。以此类推。 （4）在全部试管加完碱性硫酸铜试剂之至距第一支试管加样10分钟后，于第1支试管立即加入0.20mL Folin-酚试剂，并于2s内摇匀。1分钟后第2支试管加入0.20mL Folin-酚试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。 （5）加样完毕后将各试管每隔1min按1-6顺序放一只试管入水浴箱，分别40℃水浴10min后取出冷却至室温。 （6）以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序每隔一分钟测定一支试管内溶液吸光度并重复测三次，记下读数，求出平均值，记录数据并计算结果。 四、结果与讨论 1.实验现象记录 （1）在向试管中加入2ml碱性硫酸铜溶液并摇匀后，溶液澄清，无明显现象； （2）在向试管中加入0.20mL Folin-酚试剂并立即摇匀时观察到：溶液由浅绿立即先变黄后变浅蓝，且蓝色随时间延长而有所加深。 2.实验数据记录 测定次数各管A值2345610.0990.1980.2590.3670.23320.0970.1990.2570.3680.23330.1010.1960.2620.3700.233（对照组实验数据均为0） 2.绘制标准曲线 将测得样品管吸光度0.233代入标准曲线公式y=0.0023x中，得出样品浓度为101.30μg/ml。 即： C（未稀释蛋白含量） = C（稀释后蛋白质含量）×2×300 = 101.30μg/ml×600 = 60780μg/ml = 60.78g/L 正常人血清蛋白浓度参考范围为：60~80g/L 以上依赖所得实验数据分析得出的待测蛋白浓度落在正常范围内，可认为本次实验成功。 3.讨论 （1）本次实验中操作严格按照实验要求进行，故所测样品结果61.62g/L落在正常范围内，故可认为本次实验成功。 4.误差分析 （1）在使用加样枪移液过程中可因试液未完全放入试管而有少许残留于移液枪头导致操作误差。 （2）在使用分光光度计测吸光度时，因未能及时将溶液转移至比色皿而导致分别测定2-6试管时各组测定时间的时间间隔不一致导致误差。