衣原体及支原体的检测(实验课).doc

衣原体和支原体的检测 衣原体抗原的检测 衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法） ??【检验原理】???衣原体按其特性分为三类：沙眼衣原体（Chlamydia Trachomatis）、鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittas)和肺炎衣原体（Chlamydia Pneumoniae）。沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；另外3个则与性病性淋巴肉芽肿（Lymphor Ganuloma Venereun, LGV）的发生有关。???沙眼衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法）系用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中沙眼衣原体抗原的检测。????在实验过程中，将所得到的临床样品放入含有溶液A的样品处理管中，2分钟后，加入等量的溶液B，充分混匀后滴2-3滴在检测试剂盒的加样孔中，然后等待结果出现。在检测试剂盒的硝酸纤维薄膜的检测线上固定有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅱ；质控线上固定有羊抗鼠IgG的抗体。处理后的样品首先与结合了抗衣原体单克隆抗体-Ⅰ的胶体金颗粒混合，并靠毛细管作用使混合液向检测线移动。如果样品中含有沙眼衣原体抗原，则沙眼衣原体抗原会与胶体金复合物及检测线上的单克隆抗体Ⅱ结合形成双抗体夹心复合物，并聚集在检测线上显现出一条可见的红线，此即为阳性结果。无此红线则表示样品中无沙眼衣原体抗原存在，即为阴性结果。?????在试纸条上的质控区（C）包被有羊抗鼠IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控区（C）色带的出现表明：①样品加入量充足 ②样品在纸条上运行正常。【主要组成成份】??? 沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡：内含一条包被有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅰ、抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅱ和羊抗鼠IgG试纸条。单人份铝箔袋包装。??? 溶液A 1瓶（含0.2M NaOH溶液，7.5ml）。??? 溶液B 1瓶（含0.2M HCl溶液，7.5ml）。??? 样品处理管。??? 其他如女性取样用消毒宫颈拭子、男性取样用男用消毒拭子及计时器未在包装中提供，请自备。 【样本要求】??? 取样的质量对沙眼衣原体的检测极为重要。沙眼衣原体的检测质量有赖于准确的样品收集技术，应使样品中含有大量的细胞成分而不只是体液。??? 宫颈样品：??? 使用消毒宫颈拭子，或消毒的亚麻、涤纶拭子。在取样前用另外的拭子或棉球将宫颈口外区域的黏液抹去，将取样拭子插入宫颈管内通过鳞柱状上皮交界处，直到几乎拭子头已看不到。旋转拭子15-20秒钟取出，不要碰到宫颈外及阴道壁。这样能保证得到更多的柱状上皮细胞，而沙眼衣原体主要寄生在柱状上皮细胞中。???? 宫颈样品也可用细胞刷（未提供）收集（注意：孕妇不可用此方法）。清洁宫颈口外后，将细胞刷插入宫颈管，通过鳞柱状上皮细胞交界处，停留2-3秒钟，旋转细胞刷两圈后取出，注意不要碰到阴道壁。??? 如果检测可以即刻进行，将取样后的拭子放入样品处理管中。男性尿道样品：??? 尿道用拭子或细胞刷（未提供）可用于尿道取样。病人在取样前至少1小时内不要小便。将拭子或细胞刷插入尿道2-4厘米，旋转3-5秒钟后取出。如果检测可以即刻进行，将取样后的拭子放入样品处理管中。 每个同学取无菌棉签在无菌生理盐水中湿润后取眼角分泌物后进行衣原体的筛 查。 【检验方法】A.处理样品和对照：宫颈拭子、尿道拭子的处理：?将样品处理管放在工作台上，加入6滴溶液A。②?将采样拭子放入含有溶液A的样品处理管中，室温放置，在处理过程中不断旋转并在管壁挤压拭子，使液体不断被挤出，重复多次，处理2分钟。③?然后加入6滴溶液B，旋转并挤压拭子，尽量使液体流出，然后按感染物品的处理方法将拭子丢弃。④?处理后的样品如在60分钟内使用，并不影响试剂盒的检测结果。注意：用A、B液处理样本拭子滴加的溶液量应相等。B.检测步骤：请在操作前仔细阅读检测试剂盒说明书。将检测试剂盒从密封袋中取出，放置在洁净、干燥和水平的工作台上，标明样品编号或名称。如果检测试剂盒保存于低于室温处，须将检测试剂盒及试剂提前取出，放至室温后方可使用。将样品处理管中已处理的样品滴加2～3滴至检测试剂盒的加样孔中。等待结果的出现。加样10分钟时可判读结果。红线显示的时间根据拭子所采集沙眼衣原体含量的不同而变化，有些阳性样品可在60秒钟后出现结果。为了确保阴性结果，请勿在15分钟后判断结果。为保证检测结果的正确性，在检验前可使用生产厂家提供的阳性、阴性质控对照品检测。 【检验结果的解释】阴性结