叶绿素的.ppt

;（一）实验意义 （二）实验目的 （三）实验原理 （四）实验步骤 （五）结果计算 （六）注意事项 ;实验意义;实验目的;高等植物叶绿体色素;红光区;叶绿素与类胡萝卜素具有一定的吸收光谱，因此,在不分离的情况下,可用分光光度计法来进行测定。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素 a 、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度 A 即可求得，叶绿素 a、b乙醇溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于红光区和蓝紫光区，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 此外我们发现叶绿体色素提取液中各色素的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠 吸光度的加和性告诉我们如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，A ＝ K1C1 +K2C2; 已知叶绿素 a、b 的 95％乙醇提取液在红光区的最大吸收峰分别为 665nm 和 649nm ，可得到以下关系式： A665=82.04Ca+9.27Cb　　（1） A649=16.75Ca+45.60Cb　 （2） 将上式整理，可以得到下式： Ca=13.95A665- 6.88A649 Cb=24.96A649 – 7.32 A665 CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665 CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245; 叶绿体色素，不溶于水，易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。同时，叶绿素分子结构的“头部”是亲水的，在植物细胞内与蛋白质结合以色素蛋白复合体的结构存在于类囊体膜上，需要经过水解作用才能被完全提取出来。故通常用80%的丙酮或95%乙醇提取叶绿素。; 实验步骤 1．取2种处理新鲜玉米（完全/缺素）叶片，洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，混匀。 2．各称取0.2g，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2-3ml95％乙醇，研磨至组织发白，静置片刻。;实验步骤 3．取滤纸1张，置漏斗中，用95%乙醇湿润，把提取液沿玻棒倒入漏斗中，过滤到25mL容量瓶中，然后用少量95%乙醇冲洗研钵和研棒数次，将液体全部倒入漏斗中。 4．用滴管吸取95%乙醇，将滤纸和残渣上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至无绿色为止。最后用95%乙醇定容至25ml，摇匀。 ; 实验步骤 5．把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定吸光度。; 95%乙醇提取液中色素计算公式： ① Ca=13.95A665- 6.88A649 ② Cb=24.96A649 – 7.32 A665 CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665 ③ CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245 以上是求出叶绿素总浓度，mg.L-1 ;按以下公式计算各色素含量(mg.g鲜重-1 ) ： 叶绿体色素含量 = ;注意事项： 1、研磨要在弱光下进行，且速度要快； 2、研磨时要加入少量的碳酸钙，保护叶绿素； 3、残渣中的色素要充分洗脱； 4、波长要调准； 5、比色液不能混浊。 ;思考题