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实验二 饮料值男大肠菌群的测定
大肠菌群的定义;大肠杆菌的定义;大肠菌群和大肠杆菌的关系;卫生学意义;大肠杆菌的生物学特性;大肠杆菌的生物学特性;大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程(FDA BAM);大肠菌群测定——MPN法检验几点说明;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——生化鉴定;实验二 饮料中大肠菌群的测定
一、实验目的
1、学习饮料中大肠菌群检测程序、方法;
2、掌握饮料中大肠菌群检测结果的报告方式。
二、实验材料
1、设备和材料
温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针
2、培养基及试剂
乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂(EMB)、革兰氏染色液;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;(一)最先准备的器材;(三)应制备的培养基;
蛋白胨20g、胆盐5g、乳糖10g、0.4%溴甲酚紫乙醇溶液25ml、蒸馏水1000ml(将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正PH值至7.4,加入指示剂);或购买制好的乳糖胆盐发酵培养基、按说明配置。分装试管,每管10ml,并放入一个到气管(杜氏小管),高压灭菌115℃、15分钟。
双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外,其它成分加倍。
; 蛋白胨 10.0g 乳糖 10.0g 磷酸氢二钾 2.0g 琼脂 15.0g 伊红γ 0.4g 美蓝 0.065g 或20ml 伊红γ (20g /L)和 10ml 美蓝(6.5 g /L)
蒸馏水 1000.0mL 最终pH7.1±0.2 (25℃)
先将蒸馏水中加入磷酸氢二钾及蛋白胨、乳糖使之溶解,后加琼脂加热溶解,再调pH=7.2-7.4,再加入伊红,美蓝水溶液, 高压灭菌115℃、15分钟。
蛋白胨提供细菌生长发育所需的氮源、维生素和氨基酸,乳糖提供发酵所需的碳源,磷酸氢二钾维持缓冲体系,伊红Y和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长。琼脂是凝固剂。
大肠杆菌在EMB上发酵乳糖,形成黑色菌落,大部分有金属光泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长。 ;质控:
此培养基呈紫色,可有细微沉淀。质控菌株接种后,35℃培养18~24小时,观察结果应如下表所示:
;说明:
(1)伊红又称署红或四溴荧光素,为酸性染料。美蓝又称亚甲蓝,为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时,细菌带正电荷,染上红色,再与美蓝结合而形成紫黑色菌落,并有绿色金属光泽。二者除了作为指示剂外,还有抑制格兰氏阳性菌的作用。
(2)在碱性环境中,不分解乳糖产酸的细菌不着色。伊红、美蓝不能结合,故沙门氏菌和志贺氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。
(3)此培养基用于鉴别大肠杆菌及产气杆菌,并可快速鉴定白色念珠菌及鉴定凝固酶阳性葡萄球菌。美国公共卫生协会和美国细菌协会推荐,用于增殖或鉴别大肠杆菌的检查。但某些沙门氏菌、志贺氏菌可被抑制。培养基保存应注意避光防止氧化。 ;样品;A1组 酸奶1
;B1组 鲜奶
;;;;;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;≤ 3个大肠菌群/1L饮水
≤ 100个细菌总数/1ml饮水;;;;;
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