实验二溶血空的斑meng.ppt

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2017-05-04 发布于浙江
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实验二溶血空的斑meng

实验二;;血清分离;【操作方法】;小鼠B细胞溶血空斑形成试验;【试剂与器材】;【操作方法】;制备脾细胞悬液;5.用注射器将脾细胞悬液吸出移入试管中，再用少量Hank′s 液冲洗脾脏及平皿内残留的细胞，移入试管内。离心1000 转/分5～ 10 分, 弃上清，加5ml 冷红细胞裂解液（NH4Cl 3.735g/450ml 双蒸水+Tris 1.3g/50ml 双蒸水pH7.65），将细胞离心管插入碎冰中，每2 分钟摇动1 次，裂解10 分。离心（1000转/分）5～10 分。弃上清，用Hank′s 液洗2 次，离心（1000 转/分）5～10分钟。弃上清。用Hanks悬浮细胞，调细胞浓度到2×l06/m1。 6.将沉积的红细胞用乳头吸管吹吸悬起混匀。吸取此悬液0.1ml 放小试管中，再加0.9mlHank′s 液，即为500 倍稀释的脾细胞悬液。;眼球取血 → 处死小鼠 → 取脾→用10ml洗液冲脾→离心2000r/min 8min→弃上清，加裂解液2ml，混匀，2min后离心（转数、时间同上）→弃上清加洗液10ml，混匀，??心（同上）弃上清加4.9ml洗液混匀取0.1ml脾细胞悬液+0.9ml洗液（A液），混匀取0.1ml（A液）+ 0.1ml指示系统，混匀取50ul加入玻片小室（约用30ul）;细胞计数板（Hemacytometer）;示意图;细胞计数板的使用;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Concentration/ml = (Dilution Factor)(Count in 4 squares/4) X 104;红细胞计数;加样;玻片小室的制作;细胞混悬液的配制及灌注;【结果分析】;溶血空斑试验现象