实验五聚丙烯的酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白.ppt

实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白(Polyacrylamide Gel Electrophoresis,PAGE);掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理； 学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术； 了解血清蛋白的主要成份。;二、实验原理;Bis将单体长链连成网状结构; 连续胶电泳 采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统（样品缓冲液、凝胶缓冲液 和电极缓冲液），在pH恒定、离子强度相同的条件下进行。 优点： 制胶简单、快捷 缓冲液pH值恒定，可以防止样品进胶后因pH值改变发生的凝聚和沉淀 缓冲系统组成简单，来源广泛 缺点： 分辨率不高 ; 不连续胶电泳 采用不相同孔径的凝胶和不同缓冲系统的电泳方式，在电泳分离过程中，由 于浓缩胶的堆积作用，可使样品在浓缩胶和分离胶界面上先浓缩成一窄带，然后 在一定浓度或浓度梯度的凝胶上进行分离。 优点： 分辨率高 用于复杂和特殊样品的分离 ;不连续电泳的三种物理效应 样品的浓缩效应 凝胶的分子筛效应 电荷效应;三、实验步骤; 分离胶：A:C:D:E＝1:2:3:2（V/V） 浓缩胶：B:C:D:E＝2:1:5:2（V/V） A: pH8.9 Tris/Hcl缓冲液 B: pH6.7 Tris/Hcl缓冲液 C: 30% Acr-Bis贮存液 D: 水 E: 过硫酸铵 灌装前加入TEMED，混匀;加样 用微量注射器取样品液15μl，针头伸入玻璃管上口，沿壁加在浓缩胶面上，缓慢注入。 电泳 连接电极，上负下正； 浓缩胶：3mA／管，分离胶：4mA／管； 待示踪染料接近凝胶管底部约0.5cm处，切断电源。 剥胶 ;染色 将凝胶柱置于0.05%氨基黑10B溶液中浸染20min，然后再浸入7%醋酸溶液中 脱色。 血清蛋白在凝胶柱上可分出十多条色带。;