山羊抗小鹅瘟的高免血清的制备及临床试验.doc

山羊抗小鹅瘟高免血清的制备及临床应用试验 王文强1，王开功2，田新平 3 （1.铜仁职业技术学院，贵州铜仁554300；2.贵州大学动物科学学院，贵阳花溪 3.550025；铜仁市畜牧兽医局，贵州铜仁554300） 摘要小鹅瘟是雏鹅感染鹅细小病毒 (Goose plaguevirus，GPV)，所引起的一种急性败血型传染病。本病病程短而且死亡率高，主要侵害1月龄以内的雏鹅和雏番鸭。10日龄以下的雏鹅发病后，其死亡率可能高达100%。目前，许多养鹅场大多使用市场上销售的抗小鹅瘟血清对鹅进行免疫和治疗，但是市场上销售的抗小鹅瘟血清其产量低、成本高，且容易导致某些鹅源疫病的传播。本文采用从贵州麻江县等地的养鹅场采集的病鹅分离出的小鹅瘟野生强毒株接种于9日龄的鹅胚尿囊液制备了小鹅瘟病毒抗原，并用小鹅瘟病毒抗原加弗氏佐剂后，分多次皮下注射结合静脉注射小鹅瘟病毒抗原免疫贵州黑、白山羊。颈动脉一次性放血制备抗小鹅瘟异源高免血清，用琼脂扩散进行效价的测定，结果显示其抗体效价平均都在1∶8以上。将制备的血清与市售的抗小鹅瘟进行了对比试验，结果市售的抗小鹅瘟血清的保护率为85%，山羊抗小鹅瘟高免血清的保护率为95%。山羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点。 关键词：小鹅瘟；山羊抗小鹅瘟高免血清；抗小鹅瘟血清；对比试验 小鹅瘟又称为Derzsy’s病、 鹅流感、 鹅肝炎、 鹅传染性心肌炎、鹅肠炎、鹅腹水性肝肾炎，它是由小鹅瘟病毒 （Goose plague virus)，即鹅细小病毒(Gooseparvovirus , GPV)引起小鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、败血性、高度接触性、传染性强、病程短且死亡率高的传染病[1-4]。 根据《贵州畜疫病志》和贵州大学王开功教授[9]报道，2001年3月，贵州省惠水、三都、修文等县的养鹅场雏鹅发生了一种疫病，病鹅的临床症状和病理变化与国内的殷震和国外的Gough R. E等人[10-14]报道的小鹅瘟很相似。贵州大学动物科学学院疫病实验室对从患病的鹅群中采集的病鹅心、肝和脾等组织触片染色镜检未见细菌，同时接种血琼脂平板作需氧和厌氧培养，结果为阴性。随后将病料进行处理接种于15日龄鹅胚尿囊腔，分离到一株小鹅瘟野生强毒，同时证明了贵州省已经有本病的存在。 随着贵州省养鹅业的迅猛发展，小鹅瘟的发生和流行，对贵州省的养鹅业造成了巨大的威胁。大多数养殖场鹅病的发生集中在每年的3～4月份；3周龄的小鹅易发病；发病率为80%，死亡率高达90%～100%。虽然一些主要的养鹅场对一日龄的小鹅用抗小鹅瘟血清进行了免疫，但是随着鹅体内抗体的消长和许多养殖场种鹅的免疫程序还不完善，小鹅瘟还是存在着威胁。应用高免鹅制备的血清可以对小鹅瘟进行很好的预防和治疗，但是由于利用成年鹅制备高免血清产量低而且成本很高, 难以满足生产上的需要。所以我们从生产实际出发，参考了国内外的一些经验和技术，用从养殖场的病鹅分离出的小鹅瘟毒株，将病毒接种鹅胚进行病原的增殖，收集到的尿囊液，制作了小鹅瘟病毒抗原，采用多次免疫和颈动脉一次性采血的方法制造出了适合我省预防和治疗小鹅瘟的山羊抗小鹅瘟异源高免血清，并与中牧实业股份有限公司成都药械厂生产的抗小鹅瘟血清进行了对比试验。对防治鹅细小病毒感染的发生和流行，保障贵州省养鹅业的健康发展具有重要的意义。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1 毒株 用从贵州省惠水、三都等县的养殖场的病鹅采的心、肝、脾等病料分离出了小鹅瘟野生强毒株，由本实验室冻干保存。 1.1.2 胚胎 9日龄的鹅胚由实验室购自乌当养殖场未经免疫的鹅蛋在本实验室自行孵化。 1.1.3 样本 小鹅瘟标准抗原和阳性血清由扬州大学动物医学系王永坤教授惠赠；免疫鹅血清系采用小鹅瘟弱毒疫苗人工免疫成年鹅制备；其它常见禽病血清如新城疫病毒(NDV) 、马立克病毒(MDV) 、减蛋综合症病毒( EDSV) 和传染性法氏囊病毒( IBDV) 均由本实验室提供；禽流感病毒（AIV）血清购自哈尔滨兽医研究所。 1.1.4 试验用山羊 购于清镇养羊场，一头贵州黑山羊和一头贵州白山羊，体重30kg以上,临床检查健康。 1.1.5 试验用雏鹅 由铜仁市川主科技助农有限公司提供。 1.1.6 抗小鹅瘟血清 中牧实业股份有限公司成都药械厂生产，生产批号为兽药生产（2007）220058090。 1.2 方法 1.2.1小鹅瘟抗原的制备 取病毒感染鹅胚的尿囊液，经4000rpm离心10min,去除细胞碎片，收集上清液。于上清液中加入等量氯仿，强烈振摇，经4000rpm离心10min，舍去有机相和中间界面的杂质，收集上层水相。反复抽提3～4次，直至两相界面清晰。在水相中缓慢加入质量浓度400g/L的聚乙二醇（MW6000），使其终质量浓度达60g