常规组织病理的技术.pdf

第一章 常规组织病理技术 病理学是一门研究疾病的病因、发病机制、病理改变（包括代谢、机能和形 态结构的改变）和转归的医学基础学科，重点通过对疾病过程中各个器官、组织 形态学变化的观察，为临床解决疾病的病理诊断问题。病理学实验研究的方法多 种多样，尤其是近十多年来分子生物学技术以及其它高、新技术在病理领域的应 用，进一步拓宽了病理工作者的视野，丰富了病理研究工作的内容，也提高了疾 病诊断的准确性。但是，无论多少新技术、新方法涌现，病理工作最基本，也是 最重要的技术仍然是常规组织病理技术，离开它，一切病理诊断或研究都将无从 谈起。本章将简要介绍常规的组织病理技术，包括组织（细胞）取材、固定、包 埋、切片、苏木素-伊红染色以及常用的特殊染色方法。 第一节 组织与细胞的取材 病理标本检查包括大体和显微镜下观察两个方面，一张好的切片与组织取材、 固定、染色都有密切的关系。正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理 工作的基础。目前，由于免疫组织化学方法已普遍应用于大多数医院病理科和研 究单位，而该方法所需的材料，不仅要求组织细胞的形态完整保存，而且要最大 程度地保存组织或细胞成分的抗原性。在保证抗原性不受损伤的同时，还要求抗 原不弥散，以保证其准确定位。这就对组织的取材和固定提出了更高的要求。任 何固定不及时或处理不当的标本，都可能导致产生假阴性或假阳性结果，影响病 理诊断的准确性。 一、组 织 取 材 组织标本主要取之于活检标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖 标本等。组织取材的一般原则是：①组织块的厚度为 0.2~0.3cm；面积 1~1.5cm2， 最多不超过 2cm2，太大、太厚的组织块常常固定不好；对于冷冻切片，取材组 织块可略厚（0.3~0.4cm）；用于免疫组织化学染色的组织块，以 1cm×lcm×0.2cm 为好，不要太大，以免浪费试剂；②对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细 条，较长时可将其缠绕成同心圆状；③骨组织需先经过脱钙处理；④新鲜组织若 1 需保存，应将所取组织用锡箔纸包好，放入液氮速冻，然后置于-70℃冰箱中。 取材时应注意防止人为因素的影响，如切取组织时应用锋利的刀、剪，避免 用钝刀前后拉动或用力挤压组织。应避免使用有齿镊，同时夹取组织时动作应轻 柔，不宜过度用力，以免挫伤或挤压组织，引起组织结构的变形。取材时还应避 免过多的坏死组织或凝血块，如有线结应拔除。有钙化时，应经脱钙后再取材。 组织块上如有血液、粘液、粪便等污物，应先用水冲洗干净再取材。肿瘤标本的 取材，应选择肿瘤主体部分、肿瘤邻近组织及其肿瘤两端的切缘分别取材，并应 注意切取肿瘤组织与正常组织的交界处。 二、细 胞 取 材 及 制 片 细胞标本的收集及制片方法有印片法、穿刺法、沉淀法和活细胞标本的制备 等：①印片法：常用于活检和手术标本，优点是操作简单，细胞抗原保存好；② 穿刺法：常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等的穿刺标本。穿刺液少时，可直 接涂在载片上；穿刺液多或细胞丰富时，可滴入装有 l~2ml Hanks 液或 RPMI1640 液的试管内，轻轻搅拌后，以 500r/min 低速离心 5~10min，然后涂片；③沉淀法： 主要用于胸水、腹水、尿液和脑脊液等体液多而细胞少的标本，一般需离心后将 细胞悬液制成细胞涂片；④活细胞标本的制备：多用于科研。标本主要来源于建 株的培养细胞、短期培养细胞和外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上（细胞爬 片），也可培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，收集细胞后再进行涂片。 第二节 固定及常用固定剂 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态 结构和位置，这一过程称为“固定”。组织固定在病理工作中具有重要意义，凡 需病理检验的各种组织都需经过固定。由于组织固定不当或不良对标本所造成的 影响是无法纠正和弥补的，因此应特别加以注意。 固定的作用在于：①保持组织、细胞与生活时相似的结构和形态，防止离体 组织自溶和细菌繁殖导致的组织腐败；②保持与定位细胞内特殊的成分，如细胞 内的一些蛋白质经过固定，可沉淀或凝固定位在细胞内的原有部位；③便于区别 不同组织成分：固定可使组织细胞中各种成分的沉淀凝固并易着色；同