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实验八凯氏定氮法
实验八 凯氏定氮法测定样品中粗蛋白的含量;一、实验目的;二、实 验 原 理;3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量。
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
;1、豆浆粉
2、浓硫酸
3、混合催化剂:CuSO4/K2SO4=0.4/6
4、混合指示剂:0.1%甲基红乙醇溶液200ml与0.1%甲
烯蓝乙醇溶液50ml混合
5、 NaOH:40%
6、 2%硼酸溶液
7、0.01N标准盐酸溶液;四、实验步骤;(二)蒸馏
(1)装好蒸馏装置,如图:
;(2)洗涤蒸馏装置
①在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠,2/3体积的蒸馏水,加入4~5滴浓硫酸及4~5滴混合指示剂。
②沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室,留半漏斗水,保持水封,防止漏气。
③加热产生蒸气后,立即关闭废液排放管上的开关,蒸气进入反应室,导致反应室内的水迅速沸腾,蒸出蒸气由反应室上端口通??定氮球进入冷凝管冷却,在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。;④从定氮球发烫开始计时,连续蒸煮5min,停止加热。
⑤冲洗完毕,夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶管,由于气体冷却压力降低,反应室内废液自动抽到蒸汽收集器中,打开废液排出口夹子放出废液。;(3)蒸馏样品
①向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴,并使冷凝管的下端插入液面下
②吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室,并以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内。
③将10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室,立即加半漏斗水水封以防漏气,开始蒸馏。
④蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,从指示剂开始变色时计时,蒸馏5min。
⑤移动接受瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min。;(三)滴定
用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.01N盐酸标准溶液滴定至淡紫红色为滴定终点。
(四)洗涤凯氏定氮仪(按照上述方法);五、实验结果
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