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PAGE  PAGE 6 GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10037.1.3 v.A GENMED动物组织β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED动物组织β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物，水解所产生的发光产物，通过发光探测仪（Luminometer）测定其相对冷光单位（RLU）的变化，以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的活体组织外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。 技术背景 大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ； β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。在衰老细胞内，显示β-半乳糖苷酶活性。甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2- (5-chloro) tricyclo [3,7]-decan]-4-yl-phenyl -?-D-galacto pyranoside），是一种二恶二酮（dioxetane）类发光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，产生二恶二酮，进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的启动反应作用下，同时pH调整到12，由此二恶二酮分解，发出冷光，在冷光仪（475nm波长）下，检测发光信号，来测定β-半乳糖苷酶的活性。其发光产物半衰期为10分钟，检测敏感度可达20飞克（fg）。 ? 产品内容 GENMED清理液（Reagent A） 毫升 GENMED裂解液（Reagent B） 毫升 GENMED稀释液（Reagent C） 微升 GENMED反应液（Reagent D） 微升 GENMED??性液（Reagent E） 毫升 GENMED启动液（Reagent F） 微升 GENMED阴性液（Reagent G） 毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存GENMED裂解液（Reagent B）、GENMED反应液（Reagent D）和GENMED启动液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；GENMED反应液（Reagent D）和GENMED启动液（Reagent F）避免光照；GENMED碱性液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 用户自备 β-半乳糖苷酶标准样（GMS60003.2.2）：用于建立β-半乳糖苷酶标准曲线 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5毫升离心管：用于样品操作的容器 （微型）台式离心机：用于样品操作 黑色96孔板：用于冷光检测操作的容器 恒温水槽或培养箱：用于反应物孵育 冷光仪：用于样品冷光检测 实验步骤 实验开始前，开启化学发光仪预热，设置波长475nm；开启恒温水槽，设置温度为37℃。同时从－20℃冰箱里取出GENMED裂解液（Reagent B）和GENMED反应液（Reagent D）等置于冰槽里融化；GENMED反应液（Reagent D）和GENMED启动液（Reagent F）避免光照。然后进行下列操作： 样品准备 手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量 （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管 （选择步骤）加入xx毫升GENMED清理液（Reagent A）清洗1次 移入到一个液氮冻存管 即刻放进液氮罐过夜 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融） 放进一个15毫升锥形离心管 加入预冷的xx微升GENMED裂解液（Reagent B） 转移到预冷的1.5毫升离心管 强力涡旋震荡30秒，充分混匀 置于冰槽里孵育30分钟，期间每10