TPHA法检测梅毒螺旋体抗体试剂操作说明.docx

TPHA法检测梅毒螺旋体抗体试剂操作说明 一、概述: 梅毒螺旋体存在于病人的血液或脑脊液内,而不能在热工培养基或组织培养中生长.当病人感染梅毒螺旋体后3~4周,可在血液中检出针对梅毒螺旋体特异性抗体,并在治疗后相当长时间内仍然可检出. 可在病人血清中检出二种抗体,一种是针对非螺旋体抗原的抗体(即针对牛心肌磷脂的抗体,如RPR及国内一些EIA和金标法均是检测此非特异抗体),这种抗体在疾病活动期可检出,但在治疗后或疾病转入慢性期后会很快下降,而另一种是针对螺旋体抗原的特异性抗体,在治疗后仍可在相当长的时间内检车.在疾病慢性期也保持高滴度反应. OMEGA TPHA 试验是一种检测针对螺旋体抗体的特异的、灵敏的被动血凝试验。OMEGA TPHA试剂盒的质量标准已经我果药品生物制品检定所核定。 经我国药品生物制品检定所应用国家标准血清检定，OMEGA TPHA诊断试剂的特异性为100%（20/20）灵敏度100%（10/10）。应用574份临床血清标本，进行的临床试验结果为；特异性100%（447/447，其中包括34份胶原性病人血样和12份麻疯病人血样，二期梅毒病人血样和未分期梅毒病人血样）。 二、试验原理 ??? 试验血球为用螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为没有用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。 三、试剂盒组成 试验细胞悬液? 8.5ml 阳性对照血清2ml? 稀释液 20ml 对照细胞悬液? 8.5ml 阴性对照血清2ml? 细胞滴管 2支 以上所有试剂均为工作浓度。 试剂盒中的阴阳对照血清已经1：20稀释，阳性对照的效价为1：2560左右。直接实验不必稀释。 细胞滴管的滴量为每滴75ul，其中红色滴管用于致敏血细胞，白色滴管用于对照血细胞。 待验标本： 应用血清标本，脑脊液标本。血清标本可贮于-20℃保存，但保存不应超过4至6星期。标本不应有溶血或含有脂肪。标本要防止混入唾液，否则会影响结果的正确性。 四、操作方法： 1、在反应板的第一排：每孔加25ul（1滴）稀释液 ?? 在反应板的第二排：每孔加100ul（4滴）稀释液 ?? 在反应板的第三排和第四排：每孔加25ul（1滴）稀释液。 2、取标本25ul，加在第一排的孔中。 3、对样品进行以下稀释：用25ul移液器将加样后的第一排孔中的液体混匀后取出25ul加入第二排的孔中，混匀后再取25ul加入第三排的孔中，混匀后，从第三排孔中吸出25ul丢弃，另从第二排孔中取25ul加入第四排孔中。混匀后，再从第四排孔中吸25ul丢弃。 4、在第四排孔中加75ul（1滴）试验细胞悬液，在第三排孔中加75ul（1滴）对照细胞悬液。轻轻摇晃反应板后加盖静置45～60分钟后判读结果。 五、结果判断： 1、目测：凡出现细胞凝集者为阳性反应，不出现凝集者为阴性反应。 ?? -/不凝集：细胞沉淀在板孔中央呈边缘光滑的纽扣状； ?? ±/可凝：细胞沉淀在板孔中央呈边缘光滑的环状； ?? +/凝集：细胞形成多边形或不规则环状沉淀； ?? 2+～4+/强凝集：细胞形成边缘粗糙不规则形状或薄膜状覆盖到板孔底。 2、加入对照血细胞反应孔不应出现凝集，如果出现凝集，说明存在抗血细胞抗体，应重复试验。重复试验时，应先用对照细胞悬液将标本按1:4稀释，在室温静置45～60分钟，再经1000rpm离心5分钟，取上清液按1：5稀释，再进行试验，如果加入试验细胞悬液仍出现凝集???可判为阳性结果。 3、仪器测定：可应用奥林帕斯的PK7200或改进后的雷勃MK3酶标仪。 六、储存和运输 储存4-8℃，切勿冷冻。注意运输和储存过程中切勿将试剂盒倒置。 在收到试剂盒后，应将试验细胞悬液和对照细胞悬液充分混匀后放入冰箱保存。 七、注意事项 1、反应板使用前最好使用清洁液处理后，晾干后再使用。 2、将试剂从冰箱取出后平衡至室温，充分混匀后进行实验。 3、室温应保持在25℃-30℃，建议放入28℃恒温箱中。 4、结果判断应严格按操作时间进行。 5、如因运输中有试剂盒倒置或振动，造成部分细胞悬液中的细胞粘在瓶盖上，在操作中切勿将粘在瓶盖上的细胞再混入悬液中，否则可能会影响试验结果。