大肠癌组织中β半乳糖苷结合蛋白3与β葡萄糖醛酸苷酶表达的意义.docVIP

　　大肠癌组织中β半乳糖苷结合蛋白3与β葡萄糖醛酸苷酶表达的意义 作者：黄知果，孙维佳，何剪太，张阳德 【摘要】 目的：通过观察β半乳糖苷结合蛋白3（Galectin3）与β葡萄糖醛酸苷酶（βG）在大肠癌组织中的表达，与大肠癌的生物学特征进行比较，以探讨其临床意义. 方法 ：采用SP免疫组织化学方法检测98例临床新鲜标本，其中包括15例癌旁正常大肠黏膜组织及83例大肠癌组织中galectin3和βG的表达情况，并进行两种蛋白的表达相关性 分析 . 结果：Galectin3和βG蛋白在浸润程度深、分化程度低及Dukes分期较晚的大肠癌组织中的表达高于浸润程度浅（0.15±0.03 vs 0.16±0.05， P=0.02）、分化程度高（0.15±0.012 vs 0.16±0.03， P=0.03）及Dukes分期较早（0.18±0.06 vs 0.17±0.05）的大肠癌组织（Plt;0.05）；在大肠癌组织中，galectin3的表达和βG的表达呈正相关（r=0.628，Plt;0.01）. 结论：Galectin3和βG的异常表达在大肠癌的发生、 发展 中起着重要作用，具有一定的诊断价值. 【关键词】 β半乳糖苷结合蛋白3；β葡萄糖醛酸苷酶；结直肠肿瘤；免疫组织化学 0引言 大肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一. 我国大肠癌的发病率及死亡率呈逐年上升的趋势，在恶性肿瘤发病率中排第4位. 因此，大肠癌的发生发展机制越来越引起人们的重视. 近年来，关于大肠癌的 研究 已进入分子水平，认为其发生、发展、侵袭、转移的各个阶段，均受多个基因的调控. β半乳糖苷结合蛋白3（galectin3）是β半乳糖苷结合蛋白（βgalactosidebindin protEin）家族中的一个重要成员，广泛表达于上皮细胞和免疫细胞［1］. 有报道表明，galectin3参与多种生物学过程，例如调节细胞间及细胞与基质间的相互作用，与肿瘤细胞的转移、浸润、生长和黏附有关，以及参与炎症反应、免疫调节及细胞凋亡［2］. β葡萄糖醛酸苷酶（βG）是一种基质降解酶，与肿瘤的侵袭、转移过程有关［3］. 当大肠黏膜癌变时，galectin3和βG均出现异常表达. 目前 关于二者在大肠癌发生、发展中的作用和意义的报道尚少. 为此，我们采用免疫组织化学的方法检测galectin3和βG在大肠癌组织中的表达，探讨二者与大肠癌临床病理特征的关系及其表达相关性. 1材料和方法 1.1材料收集我院普外科200501/200712期间的新鲜大肠癌病例手术标本83（男45，女38）例；年龄58.1±8.3 ( 36～71)岁，全部获病 理学 诊断. 另取15例正常肠黏膜组织标本作为对照. 患者术前均未行化学 治疗 或放射治疗. 鼠抗人galectin3 mAb（工作浓度1∶50，购自北京中杉公司）、鼠抗人βG mAb（工作浓度1∶50，购自北京中杉公司）和免疫组化采用链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶法染色(SP法), 9000试剂盒购自北京中山生物技术有限公司,为Santa Cruz公司生产. 1.2方法组织标本经100 g/L中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，70℃烤片15 min，梯度乙醇脱水，30 mL/L H2O2灭活内源性过氧化物酶10 min，PBS 漂洗5 min×3次，用枸橼酸钠抗原修复20min, PBS 漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育30 min，封闭非特异性抗原. 滴加PBS 20～30 μL稀释的一抗4℃过夜. PBS漂洗5 min×3次. 滴加羊抗鼠二抗37℃孵育15 min，PBS漂洗5 min×3次. 滴加DAB显色5～10 min，蒸馏水洗中止，苏木素复染5 min，分化返蓝. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用PBS替代第一抗体作阴性对照. Galectin3的表达部位主要在细胞质及细胞核，βG的表达部位主要在细胞质. 有棕黄色颗粒且染色强度高于观察背景的为阳性细胞；细胞质无染色或与阴性对照一致的为阴性细胞. 超过10%的细胞呈阳性表达的为阳性病例；否则为阴性病例. 切片均采用同济千屏影像工程公司HPIAS 2000型图像分析软件进行定量分析. 统计学处理：所有数据用SPSS13.0处理, 计量资料用x±s形式表示；组间比较用方差分析及LSDt检验，计数资料采用χ2检验. Spearman秩相关检验用于分析galectin3和βG的表达相关性. Plt;0.05为差异具有统计学意义. 2结果 2.1Galectin3和βG表达与大肠癌临床病理特征的关系癌周正常大肠黏膜15例，galectin3和βG阴性或弱