大鼠局灶性脑缺血Activin A及其受体ActRⅡA表达变化及意义.docVIP

　　大鼠局灶性脑缺血Activin A及其受体ActRⅡA表达变化及意义 作者：莽靖 何金婷 李宗树1 胥桂华 郭洪亮 邵延坤 徐忠信 【摘要】 目的 探讨大鼠局灶性脑缺血激活素A(Act A)及其受体ⅡA(ActRⅡ)的表达变化 规律 及意义。方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，采用光镜、免疫组化方法检测大鼠局灶性脑缺血后梗死体积、病理变化，免疫组化染色观察Act A、ActRⅡA免疫阳性表达。 结果 正常组织有极低水平的Act A、ActRⅡA表达，免疫组化显示缺血3 h后在周边区Act A、ActRⅡA阳性细胞数量显著高于假手术组(Plt;0.05)，并随缺血时间延长而逐渐增高，于24 h达高峰。结论 局灶脑缺血损伤可诱导内源性神经元Act A高表达，并可能通过特异性跨膜信号受体ActRⅡA发挥靶源性作用。 【关键词】 局灶脑缺血;激活素A;激活素受体 　　【Abstract】 Objective To investigate expression of Activin A and ActRⅡA in rat after focal cerebral ischemia.Methods Focal cerebral ischemia anent middle cerebral artery occlusion (MCAO) in the rat，injury and infarction volume in brain tissue easured by immunohistochemistry.Results Activin A and ActRⅡA protEIn expressed at a very lo operation group，a strong upregulation in cortical areas next to the infarct ia and reached acme 24 h after MCAO.Conclusions The expression of Activin A and ActRⅡA is gradually increased after focal cerebral ischemia，ia;Activin A;ActRⅡA 　激活素A(Activin A，Act A)作为一种新近发现的内源性神经保护物质，正日益受到关注。ActA是转化生长因子β(TGFβ) 超家族的成员之一，是由βA亚基通过二硫键连接而成的二聚体结构细胞因子〔1，2〕,具有广泛的生物学功能，但其在缺血性脑损伤中的表达变化及作用机制尚不明确。本实验采用大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，对 Act A、ActRⅡA表达的动态变化规律进行了研究，探讨其在缺血性脑损伤中的作用。 　 　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 成年健康雄性CAO模型组缺血3、6和24 h，每组各6只。 　　1.2 MCAO模型大鼠评价 采用神经功能缺损评分评估MCAO后大鼠的神经损伤状况。HE染色苍白，神经细胞消失，核固缩，神经纤维网空泡化组织为梗死区，每张切片用图像分析检测、 计算 梗死面积。将每个鼠脑标本的所有含梗死灶组织块的梗死体积相加，为梗死体积值。 　　1.3 免疫组织化学方法检测Act A、ActRⅡA表达 ①在模型建立后3、6、24 h，大鼠经10%水合氯醛深度麻醉后用含4%多聚甲醛的0.1 mol/L PBS(pH7.4)进行灌注固定。取以视交叉为中心相当于前联合连续脑片继续固定4～6 h，常规脱水、浸蜡、包埋。②采用SP法(Act A、ActRⅡA一抗、二抗及DAB试剂盒购自北京博奥森生物)。细胞浆、胞膜染成棕黄色为阳性细胞。③应用彩色病理图像分析系统分析切片。所有切片均在同一光强度及放大倍数下进行，每张切片选取3个200倍镜下视野，计数阳性细胞数，以单个标本为单位，取平均值。 　　1.4 统计学分析 数据以x±s表示，应用SPSS16.0软件进行方差分析。 　 　2 结 果 　　2.1 大鼠神经行为学评分及梗死体积测定 模型组麻醉清醒后出现左前或左前后肢瘫，提尾悬空时左前肢内收腕屈曲，头向左侧背侧方扭曲，运动中出现向左转圈现象。假手术组无神经损伤体征。各组未见死亡大鼠。缺血3 h模型组HE染色光镜观察可见明确梗死灶位于大脑中动脉供血区的皮质、皮质下白质和纹状体，随缺血时间延长梗死体积逐渐增大，24 h达最高值;假手术组未见明确梗死灶，见图1。 　　2.2 各组大鼠免疫组织化学染色结果 假手术组见极少Act A、ActRⅡA阳性细胞表达;模型组随缺血时间延长，大脑中动脉供血区皮质、皮质下白质及纹状体Act A、ActRⅡA表达阳性细胞数增加，梗死周边区更明显，缺血