实验13维生素AD胶丸中维生素A的含量测定.ppt

实验十三  维生素AD胶丸中维生素A的含量测定 简介 维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烷，由于其中有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，并且其对酸不稳定。其醋酸酯比维生素A稳定，临床使用一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。因此，维生素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外，还需充氮或加入合适的抗氧剂。维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 一 目的要求 掌握UV三点校正法的原理和维生素A含量测定的方法。 二 基本原理 1.杂质的无光吸收在310nm～340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。 2.物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。 ? 三 实验仪器与器材 1.溶液和试剂：维生素A胶丸（规格2.5万单位/粒）、环己烷、乙醚。 2.仪器和其他用具：紫外可见分光光度仪（具扫描功能）、分析天平、石英比色皿、25mL容量瓶若干、移液管、注射器、刀片、烧杯若干个。 四 操作步骤 1.胶丸内容物平均重量的测定 取胶丸20粒，精密称定，（2.4641g），用注射器将内容物抽出，再用刀片切开丸壳，用乙醚逐个洗涤丸壳三次，置50mL烧杯中，再用乙醚浸洗1-2次，置通风处，使乙醚挥散，精密称定，得总壳重（0.7213g），算出每丸内容物的平均重量。 四 操作步骤 2.供试品溶液的制备与测定 第一种方法 方法：精密称取一粒维生素AD胶丸内容物（0.0048g），用环己烷溶解并定量稀释成25mL。取0.8mL再用环己烷稀释至25mL，即制成每mL中含9~15单位的溶液。按照分光光度法，测定其吸收峰的波长，并分别在300nm,316nm,328nm,340nm,360nm五个波长下测定吸收度。 四 操作步骤 计算： （1）求E1%1cm ：由 A= E1%1cm ×C×L 求得 E1%1cm =A/（C×L） （2）求效价（IU/g）：效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数（IU/g）。 即IU/g= E1%1cm ×1900 四 操作步骤 （3）求维生素A占标示量的百分含量： 标示（% ）= （E1%1cm×1900×W）/标示量 ×100% =（A×D×1900×W）/（W×100×L×标示量）×100% 四 操作步骤 （4） A值的选择 首先计算吸收度比值（即Ai/A328） ① 如果最大吸收波长在326nm～329nm之间，并分别计算5个波长下的差值，均不得超过±0.02时，则不用校正公式计算吸收度，而直接用328nm处测得的吸收度A328求得E1%1cm。 四 操作步骤 ②如果最大吸收波长在326nm～329nm之间， 并分别计算5个波长下的差值，如有一个或几个超过±0.02，这时应按以下方法判断： 第一法校正公式：A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340) 再按下式计算校正吸收度与实测吸收度的差值对实测吸收度的百分率（d）： d =（A328(校正) —A328(测)）/ A328(测) ×100% ③如果最大吸收波长不在326nm～329nm之间，也不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。 四 操作步骤 第二种方法 方法：精密称取供试品适量（约相当于维生素A总量500单位以上，重量不多于2g），置皂化瓶中，加乙醇30mL与50％（g/g）氢氧化钾溶液3mL，依法皂化后用不含过氧化物的乙醚提取并定量稀释成每1mL中含维生素A为9~15单位的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸光度，并确定最大吸收波长（应为325nm）。 计算：计算同第一法，换算因子为1830。 第二种方法校正公式： A325（校正）=6.815A325－2.555Ａ310－4.260A334 四 操作步骤 维生素A吸收度差值 五 结果与讨论 （1）计算各波长处吸收度与328nm处吸收度比值，并与规定值比较。 （2）计算校正吸收度，并与实测值比较，即求d。 （3）求（E1%1cm）。 （4）求效价（IU/g）。 （5）求标示量的百分含量。