1蛋白质抽取︰.PDF

生化科技學系 酵素純化與分析 1 1 蛋白質抽取︰ 蛋白質的純化過程，可略分為三個階段： (1) 粗蛋白質 (crude protein)︰由採樣開始→均質打破細胞→抽出全蛋白質，多使用鹽析沉 澱法，可去除蛋白質以外的物質，並粗略地沈澱出目標蛋白質，都是利用蛋白質的基本 物理化學性質，沒有什麼高科技但極為關鍵，令人深入體驗蛋白質的基本性質。 (2) 部分純化 (partially purified)︰最主要的純化階段，大多使用各種管柱層析法，乃是蛋白 質純化的當家舞台，使用工具最多樣且有趣，通常都有大幅度的純化效果。 (3) 均質蛋白 (homogeneous)︰目標蛋白質更精製純化至均質，可用製備式電泳或 HPLC，通 常到此階段的??收率都很低，除非有特殊需求，否則不需達到如此高純度。 每個階段使用不同純化策略，並伴隨各種分析方法去評估蛋白質的質量，以監測純化效果 與回收率，最後所得到的純質蛋白質，可進行更精密的分析與應用。全貌匯整於圖 1.1。 圖 A Purification B Analysis (1) Crude Protein (1% pure) (1% Protein Crude (1) 1.1 Material Background knowledge about Material Protein / Activity assay Extraction Electrophoresis (1) 粗蛋白質 純 Naive SDSCrude protein 化 Protein Gradient PAGE fractionation 階 Ammonium sulfate Organic solvent Enzyme kinetics (2) Partially Purified(2)Partially Molecular weight 段 pure) (50~90% Chromatography Sedimentation coefficient (2) 部分純化 Gel filtration determination 及 Ion exchange Quaternary structure Affinity chromatography Partially purified FPLC Isoelectric focusing 分 Peptide mapping E