荧光染料CFSE作为细胞标记的特性研究.PDF

( ) ( ) 140 ISSN1007 - 8738 细胞与分子免疫学杂志 Chin J Cell Mol Immunol 2004 , 20 2 ( ) ·论著· 文章编号 : 1007 - 8738 2004 02 - 0140 - 02 荧光染料 CFSE 作为细胞标记的特性研究 陈蕾蕾 , 陈军浩 , 孙雪梅, 施广飞 (南京大学医学院附属南京鼓楼医院医学检验中心 , 江苏 南京 210008) 摘要 Hyclone 公司产品。2. 5 g/ L 胰蛋白酶为 Hyclone 公司产品。 目的: 探讨荧光染料 CFSE 在作为细胞标记时的特性。方法 : CFSE 为 Fluka 公司产品。MTT 及 DMSO 为 Sigma 公司产品。 应用激光共聚焦扫描显微术 , 观察 CFSE 在细胞中的准确定 FicollPaque 分离液为 Pharmacia 公司产品。Nacl 及 NaHCO3 等 ( ) 位。利用 MTT 比色法测定 CFSE 标记的细胞及未标记细胞的 常规试剂 , 均为国产分析纯 AR 。激光共聚焦显微镜 ( ) ( ) ( ) 增殖情况 ; 通过细胞计数和流式细胞仪 FCM , 测定细胞在 bLSCM2002 型 为 Chinde 公司产品。全自动酶标仪 sunrise 不加任何刺激及诱导的情况下细胞数及平均荧光强度的变化 为 BioBank 公司产品。 趋势。结果 : 在共聚焦显微镜下 , 可见 CFSE 标记的细胞的细 1. 2 　方法 胞膜、细胞核及细胞质中都带有绿色荧光 , 以胞核荧光最强。 1. 2. 1 　ECV304 细胞的 CFSE 染色 　CFSE 用 DMSO 溶解成 利用 MTT 比色法测定标记及未标记细胞的 A 值无显著差异。 5 mmol/ L 的储存液 , 于 - 20 ℃避光保存。使用时 , 用无血清 连续 6 d 记录的细胞数与 FCM 测定的平均荧光强度呈负相 μ DMEM 培养液稀释成 5 mol/ L 的工作液备用。抽取猪骨髓 20 关。结论 : CFSE 可作为细胞的标记物 , 用于细胞移植的体内 mL , 离心洗涤去除血清及脂肪 , 用无菌生理盐水将骨髓稀释 检测、细胞增殖试验及细胞分裂周期的估算等研究。 并制备成单细胞悬液 , 小心地加入到 FicollPaque 分离液液面 关键词 :