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蛋白质标签  中国农业大学 齐孟文  蛋白标签（proteintag）是指利用 DNA 体外重组技术，与目的蛋白一起融合 表达的某些抗原表位的多肽、结构域或蛋白，以便于目的蛋白的表达、纯化、检 测和示踪等。标签通过与与配体作用而被赋予不同的功能，配体一般包含一个连 接集团，用于和标签发生亲和作用或共价结合，同时还含有一个功能集团，功能 集团常为亲和集团、荧光和染料分子、光控灭活集团等。随着技术的不断发展， 研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在 基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 Medium Ligand Tag Cleavage Recombinant Bead Site Protein 图 1.蛋白质亲和标签作用过程示意图。 1.用以纯化、检测的亲和标签 融合标签的作用主要是用于目的蛋白的检测和纯化，有时也用来增加目的蛋 白在细胞质中的可溶性或帮助将目的蛋白运转到细胞周质中以提高目的蛋白的 表达产量。根据用途，融合标签一般有两种选择，一种是多肽小标签，其一般不 影响融合蛋白的三级结构及生物活性，在某些应用时，无需去除，如因不具免疫 源性，融合蛋白可直接用于抗体生产;另一种是以大的肽或蛋白质作为融合担体， 通过影响蛋白质的折叠，以提高其溶解性，缺点是对于结晶或抗体生产，标签必 须被去除。常用的亲和标签见表1,亲和纯化系统见表2。 表1.常用亲和标签的序列和大小 标签 残基 序列 大小（KDa） Plog-His 通常6 HHHHHH 0.80 个 FLAG 8 DYKDDDDK 1.01 c-myc 11 EQKLISEEDL 1.20 Strep-ta 8 WSHPQFEK 1.06 gⅡ SPB 38 MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQRE 4.03 P GST(谷胱 211 蛋白质 26.00 甘肽疏基 转移酶) MBP(麦芽 396 蛋白质 40.00 糖结合蛋 白) 纤维素结 27-18 结构域 3.00-20.0 合结构域 9 0 壳聚糖结 51 结构域 5.59 合结构域 表 2.标签融合蛋白亲和洗脱系统 亲和标签 亲和基质 洗脱条件 Plog-His Ni2+-NIA,Co2+-CMA(Talon) 150mM 咪唑或低 pH FLAG Anti-FLAG 单抗 pH3.0 或 2-5mMEDTA c-myc 单抗 低 pH Strep Strep-Tactin(修饰的链球菌 2.5mM 脱硫生物素 抗生物素蛋白 GST 谷胱甘肽