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化学发光实验的步骤
羟自由基清除实验(芬顿反应) 溶液配制 检测仪器 反应过程 注意事项 溶液配制 Na2CO3-NaHCO3缓冲液(CBSS,0.1mol/L): Na2CO3 Mr = 105.99, 0.1mol/L 溶液为10.599 g/L; NaHCO3 Mr = 84.01, 0.1mol/L 溶液为8.401 g/L; pH10.2 Na2CO3 : NaHCO3 (6:4) Fe2+SO4-EDTA (3mM): 100ml H2O 加入 Fe2+SO4·7 H2O 0.08346 g, EDTA 0.0877 g 0.1 M NaOH: 0.2g NaOH 加入到50 ml H2O. 0.1 mM luminol 溶液: 10 mM luminol 储液, 88.585 mg luminol 溶于少量DMSO中, 加0.1 M NaOH 定溶至50 ml . 0.1 mM luminol, 1 ml 10 mM luminol 加99 ml CBSS(pH10.2). 3% H2O2: 100 μl 30% H2O2 加900 μl H2O 检测仪器 检测仪器: WDD-1型发光测试仪(北京第二光学仪器厂) 检测条件: 电压: 读数调零后,该仪器电压调至主针(内圈)8, 副针(外圈)6. 反应过程 0.1 mM luminol 溶液880 μl 100 μl 样品(对照为H2O) 10 μl Fe2+SO4-EDTA (3mM) 10 μl H2O2(3% ) 注意事项 H2O2溶液 应当低温避光保存 检测过程中, 反应溶液均在冰浴中保存更佳 Fe2+SO4-EDTA和H2O2 溶液, 均分开贴在检测管管壁, 开始记时时摇匀开启反应. 样品混匀后,记录30 S 后的读数. 超氧阴离子清除实验(邻苯三酚自氧化) 溶液配制 检测仪器 反应过程 注意事项 溶液配制 0.1 mM luminol 溶液: 10 mM luminol 储液, 88.585 mg luminol 溶于少量DMSO中, 加0.1 M NaOH 定溶至50 ml . 0.1 mM luminol, 1 ml 10 mM luminol 加99 ml CBSS(pH10.2). 4 M NaOH: 1.6 g NaOH + 10 ml H2O 3 mM邻苯三酚: H2O, 用 HCl 调 pH 值为3.5; 0.3 M邻苯三酚, 0.037833 g 邻苯三酚,加入1 ml pH3.5 的H2O 中, 3 mM邻苯三酚, 10 μl 0.3 M邻苯三酚+ 990 μl H2O(pH3.5). 反应过程 0.1 mM luminol 溶液810 μl 100 μl 样品(对照为H2O) 80 μl NaOH (4M) 10 μl邻苯三酚(3mM ) 检测仪器 检测仪器: WDD-1型发光测试仪(北京第二光学仪器厂) 检测条件: 电压: 读数调零后,该仪器电压调至主针(内圈)10, 副针(外圈)0. 注意事项 实验过程中,邻苯三酚溶液需冰浴中保存 邻苯三酚溶液碱性条件下容易氧化,若对照数值有较大变化,则需配制新溶液 3 mM邻苯三酚溶液,贴在检测管管壁,开始记时时摇匀开启反应. 样品混匀后,记录8 S (记录时间也可以自己摸索)后的读数. * *
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