检验的技术的操作程序.ppt

检验技术操作程序zrf;支原体培养操作程序;操作程序;实验原理 10%～20%的非淋菌性尿道炎由解脲支原体引起。解脲支原体含有多种酶，尿素酶活性是其特有的性质。; 培养与鉴定是确定支原体最可靠的方法。在含指示剂系统的肉汤培养基中进行培养可显示支原体的代谢活性。人型支原体经一系列的反应可使精氨酸代谢产生氨，pH值升高，指示剂由黄色变为粉红色。解脲支原体产生尿素酶，后者可将尿素分解成氨，也可以使指示剂由黄色变为粉红色。若有生殖支原体生长，则分解葡萄糖，产生丙酮酸和乳酸，pH值下降，液体颜色由红变黄，且无明显混浊。; 该方法简便、有效、价格低廉且有特异性。目前已广泛用于支原体感染的临床检测;采取标本 男性需用无菌细小棉拭缓慢插入尿道2-4cm处，轻轻捻转取柱状上皮细胞标本。女性需用阴道窥器扩张后先用棉拭拭去宫颈口的分泌物，再用另一棉拭插入宫颈1-2cm处捻转10-30秒，取柱状上皮细胞;实验操作 然后放入培养基中，充分振洗后将棉拭子弃去，旋紧瓶盖，置37℃孵箱中培养24-48小时。 男性除用尿道拭子外，可取前列腺液、精液或中段尿；女性除用宫颈拭子外，可采用羊水、但不推荐尿液。加样量均为0.2ml，培养方法同上。;结果判断 解脲、人型支原体培养24小时后观察，培养基变红为阳性，若培养至72小时，培养基仍未变红，可判为阴性。生殖道支原体培养4～7天观察，培养基由红色变成黄色阳性，反之为阴性。;注意事项 1、接种标本时，三种培养基不能混合使用（即不能用接种了解脲支原体的棉拭子去接种人型支原体或生殖道支原体，反之亦然）。 2、支原体生长时，培养基一般无明显混浊，如有小颗粒沉淀或粘于管壁，亦属正常。 3、如为Mh-Uu培养基，24小时变红者可能为Uu支原体感染，48小时以后变红者可能为Mh支原体感染。 4、阳性结果的支原体标本可保存在冰箱中。;支原体药敏试验 ; 药敏抗生素全部采用临床常规治疗用抗生素，药敏分别为：四环素（TET） 螺旋霉素（ACE） 红 霉 素（ERY） 罗红霉素（ROX） 强力霉素（DOX） 可乐必妥（CRA） 泰利必妥（OFL） 美满霉素（MIN） 交沙霉素（JOS）阿奇霉素（AZI） 克拉霉素（CLA） 司帕沙星（SPA）;标本采集 男性需用无菌细小棉拭缓慢插入尿道2-4cm处，轻轻捻转取柱状上皮细胞标本；女性需用阴道窥器扩张后，先用棉拭拭去宫颈口的分泌物，再用另一棉拭插入宫颈1-2cm处捻转10-30秒，取柱状上皮细胞。 男性除以上方法取标本外，还可取前列腺液、精液或中段尿沉渣（中段尿10ml2000T / min离心10分钟）做标本；女性除以上方法取标本外，可取半水做标本，但不推荐用尿液做标本；加样量均为0.2ml ;试验操作 1、接种前先使培养基在室温中预温,并在管上作好标记。 2、拧开培养基瓶盖，用无菌吸嘴吸取100ul左右培养液加入药敏反应板高浓度（H）的1号孔（即空白对照孔），再将标本棉拭在瓶壁和培养基接触面上涂挤，丢弃棉签（也可直接将50ul阳性培养液加入培养基中）,盖上瓶盖,摇匀。 3、其余各孔内均加入100ul左右接种过标本的培养液,然后每孔均加入1滴液体石蜡油覆盖液面,以免培养液蒸发,最后盖上药敏反应板板盖。 4、将药敏反应板置37℃培养箱中培养24-48小时,观察结果。;结果判断 第一排（高浓度）第一孔为空白对照孔，不变红为阴性（—），则试验成立。 第二排第二孔为支原体培养孔，变红为阳性（+），说明有支原体生长。 第二排药敏板条（低浓度）第一孔为解脲支原体孔，变红为解脲支原体阳性，且浓度≥104。 第二排药敏板条第二孔为人型支原体孔，变红为人型支原体阳性，且浓度≥104，两孔均变红为混合感染，浓度均≥104。 第一排药敏反应板3-14孔为高浓度药敏孔。 第二排药敏反应板3-14孔为低浓度药敏孔。 ; 高低浓度药敏孔均不变色（浅色）表示对相应的抗生素敏感；低浓度药敏孔变红而高浓度药敏孔不变红（浅红），表示对相应抗生素中度敏感；高低浓度药敏孔为变红，表示对相应的抗生素耐药。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14空白 混合孔HL UU TET ERY DOX OFL JOS