梅毒实验室检测技术精要.ppt

非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 3、定量试验 稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。 ？ 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:256 1:128 1:512 定量试验结果判断 血清稀释度 结果 ？ 1:2 1:4 1:8 1:16 + - - - - ？ + + - - - ？ + + + + - ？ 问题：定量试验原倍血清滴度是多少？ 问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？ 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 3、定量试验 稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。 1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:256 1:128 1:512 定量试验结果判断 血清稀释度 结果 1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 + - - - - 1:1 + + - - - 1:2 + + + + - 1:8 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。 因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒现症感染和既往感染 VDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。 梅毒 病期 敏感性 (%) 特异性 (%) 一期 86（77-99） - 二期 100 隐性 98(95-100) （一般滴度1:8， 但不排除1:8） 晚期 73 非梅毒 - 98(93-99) 血清固定 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。 血清固定：一直保持低滴度，不转阴 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 1:1 1:2 1:8 1:4 1:16 血清稀释 1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 - - - + + - - + + + 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 前带现象 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 假阳性反应 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可排除。 生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进行排除。 梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。 问题：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？ 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）-IgM、IgG TPPA TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。 TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。 + 明胶颗粒 梅毒抗原 + 抗原致敏颗粒 抗原致敏颗粒 血液中抗体 抗原抗体凝集 TPPA试验原理示意图 * 4+： 粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+： 粒子光滑覆盖大部分底 2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环 ±： 粒子沉集孔底，中央形成一小点 –： 粒子紧密沉积孔底中央 TPPA试验结果判读 敏感性 特异性 病期 一期 二期 隐性 临床试验a 100 100 100 美国CDC 88 100 100 95 a:均为RPR阳性标本 ELISA/ CLIA ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。 本法可用于大样本血清检测。 化学发光法的临床应用意义基本同ELISA 化学发光法的敏感性？？ 梅毒免疫