PCR反应体系与反应条件 - 资料中心 - 生物在线.docVIP

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2017-05-07 发布于天津
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反应体系与反应条件标准的反应体系扩增缓冲液种混合物各引物各模板聚合酶加双或三蒸水至反应五要素参加反应的物质主要有五种即引物酶模板和引物引物是特异性反应的关键产物的特异性取决于引物与模板互补的程度理论上只要知道任何一段模板序列就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物利用就可将模板在体外大量扩增设计引物应遵循以下原则引物长度常用为左右引物扩增跨度以为宜特定条件下可扩增长至的片段引物碱基含量以为宜太少扩增效果不佳过多易出现非特异条带最好随机分布避免个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列避免引物内部出现二级结构避

PCR反应体系与反应条件 -------------------------------------------------------------------------------- 标准的PCR反应体系：　　　　　　 10×扩增缓冲液　 10ul 　　　　　　 4种dNTP混合物　各200umol/L 　　　　　　引物　　　　　各10～100pmol　　　　　　　模板DNA 　　　　0.1～2ug　　　　　　　Taq DNA聚合酶　 2.5u　　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L 　　　　　　加双或三蒸水至　100ul 　　