乙肝后肝硬化患者血清代谢组的核磁共振氢谱研究.docVIP

　　乙肝后肝硬化患者血清代谢组的核磁共振氢谱研究 作者：杨永霞,杨生义，梁敏锋，丘翠环, 张薇,许静芬 【摘要】 目的 应用核磁共振氢谱(1H nuclear magic resonance,1H NMR)和主成分分析(principal ponent analysis,PCA)方法研究乙肝后肝硬化患者血清的代谢组变化。方法 慢性乙肝患者血清20例和乙肝后肝硬化患者血清18例，采用BRUKER Avance 500 MHz 超导核磁共振波谱仪进行检测，并运用模式识别方法分析乙肝后肝硬化患者血清代谢组变化。结果 乙肝患者和乙肝后肝硬化患者血清的代谢组具有明显的差异。肝硬化引起血清中的脂和胆碱/磷酸胆碱降低，而乳酸、丙氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、肌酸以及葡萄糖的含量升高。结论 通过上述代谢物的变化可以区分乙肝和乙肝后肝硬化患者。这种基于磁共振氢谱和主成分分析的代谢组学方法可以为肝硬化的诊断提供可靠的分子水平上的代谢依据。 【关键词】 磁共振氢谱;肝硬化;代谢;主成分分析 Abstract:Objective 1H Nuclear magic resonance (1H NMR) spectroscopy in conjunction ployed to characterize the metabolite position of the serum samples from the patients easured for serum samples from 20 patients etabonomic changes.Results There etabonomic differences betethionine,glutamine,creatine and glucose. Conclusion The results shoetabolite changes of serum from the patients arkedly different from those of the patients etabonomic technique could provide an efficient tool for the diagnosis of posthepatitic cirrhosis at molecular level. 　　Key agic resonance; posthepatitic cirrhosis; metabonomics; principal ponent analysis 　 核磁共振1H谱(1H nuclear magic resonance， 1H NMR)是研究生物样品(如生物组织/尿液/血液/组织提取液等)代谢组变化的一种很重要的手段,而且这种方法具有良好的客观性和可重复性，无需对样品进行特殊处理,可以实现对整个代谢组的同步检测。肝硬化是影响人类健康的主要疾病之一，慢性乙肝若不能有效控制，可 发展 为肝硬化，如果能在肝硬化出现早期准确诊断，则会在很大程度上改善肝病的预后[1]。本研究采用磁共振1H谱来研究乙肝后肝硬化患者血清的代谢组特征，结合模式识别分析方法，找出肝硬化出现后代谢组的改变，评价磁共振氢谱用于乙肝后肝硬化诊断的临床应用价值。 　 　1 材料和方法 　　1.1 样品收集 收集南方医科大学南方 医院 感染内科患者血清样本38例(根据临床乙肝和乙肝后肝硬化诊断标准[2]，慢性乙肝20例,乙肝后肝硬化18例)，置-80 ℃冰箱贮存备用。 　　1.2 样品预处理 1H NMR谱采样前，将所有血清样本解冻，在4 ℃下，10 000 g离心 10 min。取300 μL上层血清加至5 mm NMR测试管中，后加入0.2 mol/L 磷酸缓冲溶液(0.2 mol/L Na2HPO40.2 mol/L NaH2PO4，pH=7.4)200 μL 和重水50 μL，振荡混匀。 　　1.3 NMR实验 NMR实验采用BRUKER Avance 500 MHz 超导核磁共振波谱仪，实验温度为298 K。采用CarrPurcellMEiboomGill (CPMG，relaxation delay90(τ180τ)nacquisition)脉冲序列，回波时间2 nτ=100 ms， 4 s延迟时间，10 kHz谱宽，64 k数据点，采集次数为128。傅立叶变化前加0.3 Hz 指数窗函数处理。采用TOPSPIN 2.0软件进行手动调相和基线校正。化学位移以乳酸甲基双重峰δ 1.33进行定标。 　　1.4 1H NMR谱的数据预处理和主成分分析 采用软件TOPSPIN 2.0对所有1H CPMG谱进行自动积分，积分区间δ0.5～9.0，积分间隔0.02 pp