云芝多糖、维生素E对小鼠CCl4肝损伤保护作用的研究.docVIP

　　云芝多糖、维生素E对小鼠CCl4肝损伤保护作用的研究 作者：孙设宗 唐微 张红梅 赵杰 【摘要】 目的 观察云芝多糖(CVP)及CVP和VE联合应用对CCl4肝损伤的作用，探讨CVP抗肝损伤的作用机制。方法 4月龄昆明种小鼠60只，随机分为正常对照组、造模组、CVP灌胃高低剂量保护组(300、150 mg)、CVP和VE保护组(VE 250 mg+150 mg CVP、VE 250 mg+300 mg CVP)，每组10只。用CVP灌胃饲料中加VE，饲养7 d，末次灌胃2 h，正常对照组腹腔注射调和油溶液，其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重)，24 h眼球取血后处死小鼠，取出肝脏称重 计算 肝体指数后制备肝匀浆;测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 与模型组比较，CVP可降低肝体指数及血清中ALT和AST的含量(Plt;0.05，Plt;0.01);提高SOD活性和GSH的含量(Plt;0.01)，降低MDA的含量(Plt;0.001)，与VE联合应用有协同效应。结论 CVP可减轻实验性肝损伤所致炎性浸润，提高SOD的活性和GSH的含量，加速自由基的清除，对实验性肝损伤有保护作用，与VE联合应用有协同效应。 【关键词】 云芝多糖;维生素E;肝损伤;保护作用 云芝多糖(Coriolus versciclor polysaccharides CVP)具有多种生物活性，可提高抗氧化酶活性、清除自由基以及对氧化应激有抑制和拮抗作用〔1，2〕;维生素E(VE)是经典的抗氧化物质〔3〕。各种原因的肝损伤与氧化应激密切相关，但CVP对肝损伤保护作用及机制的研究报道较少，CVP、VE联合应用对实验性肝损伤保护作用尚未见报道。本文以CCl4制备肝损伤模型，研究CVP单独应用及CVP和VE联合应用抗实验性肝损伤的作用及机制，为拓展CVP和VE的临床应用提供实验依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 动物 昆明种4月龄雌性小鼠60只，体重32～38 g/只，本院动物中心提供。 　　1.2 药品、试剂与仪器 丙二醛(MDA)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)，超氧化物岐化酶(SOD)，谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，其余为国产分析纯生化试剂。ZS831型内切式组织匀浆机(浙西机械厂)，MDF382E型超低温冰箱(日本Sony公司)，722S型分光光度计(上海第二光学仪器厂)，RA50半自动生化分析仪(美国Technicon公司)。 　　1.3 给药方法 60只小鼠随机分为正常对照组(常规饲料，饮自来水)、病理造模组(常规饲料，饮自来水)、CVP保护组(高、低二组，常规饲料，自由饮水，每天按体重300、150 mg/kg CVP灌胃1次)、CVP+VE保护组(每天按体重150、300 mg/kg CVP灌胃，同时给予饲料中加VE 250 mg/kg饲料，自由饮水)，每组10只。饲养7 d，末次灌胃2 h，正常对照组腹腔注射调和油溶液，其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重)，24 h后眼球取血，分离血清，用速率法测ALT、AST。 　　1.4 检测指标 处死小鼠，取出肝脏置冰生理盐水中洗净血液，用滤纸吸去水分称重，计算肝体指数;用pH7.4的PBS按1∶10稀释冰浴下制备肝匀浆，4 000 r/min离心5 min，取上清液用双缩脲法测肝匀浆中蛋白质含量，用PBS稀释成4 mg/ml蛋白，按试剂盒要求测MDA、GSH、SOD的含量。取上述各组肝匀浆按 　 　3 讨 论 　　CCl4进是经典的肝损伤毒物，经肝细胞代谢产生自由基，无选择性的损伤肝细胞的各个组分，首先引起膜性损伤，严重时可导致肝细胞变性坏死〔5〕。本研究表明CCl4可致实验性肝损伤，通过脂质过氧化作用产生过量的自由基广泛损伤肝细胞，导致模型组小鼠肝体指数增加，MDA、ALT、AST显著升高，SOD、GSH降低。 　　ALT和AST是反映肝细胞损伤和线粒体膜损伤的重要指标。ALT存在细胞的可溶部分，正常情况下血清中ALT活性极低，当肝细胞损伤时膜通透性增大ALT释放入血而导致升高，CVP保护组可降低血清ALT活性，但与模型组比较无统计学意义，说明CVP直接清除自由基的能力较弱;VE和CVP联合应用对肝细膜的保护作用加强，与模型组比较可显著降低血清ALT的活性。AST主要分布在线粒体内〔6〕，血清中AST的含量可反映线粒体的受损情况，不同浓度CVP保护组可降低血清AST的含量，与模型组比较有显著差异，提示CVP对线粒体膜的保护作用较强;VE和CVP联合应用