五味子醇提残渣中粗多糖的体外抗氧化活性研究.docVIP

　　五味子醇提残渣中粗多糖的体外抗氧化活性研究 作者：陈荣华，吴向阳，仰榴青，邹艳敏，张蓉仙 【摘要】 　　目的研究五味子醇提残渣中粗多糖的体外抗氧化活性。方法采用水提醇沉法从五味子醇提残渣中提取粗多糖，用苯酚-硫酸法测定多糖含量；采用化学比色法测定五味子粗多糖对H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响以及对小鼠肝匀浆丙二醛（MDA）生成的影响；用碘量法测定粗多糖的油脂抗氧化性能。结果五味子醇提残渣中粗多糖的得率为9.14%，粗多糖中多糖含量为42.33%；五味子醇提残渣粗多糖在体外能有效抑制脂质过氧化，抑制红细胞溶血和MDA生成的IC50值分别为3mg/ml和1.32mg/ml；五味子粗多糖能有效抑制食用油脂的过氧化，0.2%多糖组对猪油和大豆油的抑制率均达64%以上。结论五味子粗多糖具有较好的体外抗氧化活性，可开发为功能性食品。 【关键词】 五味子醇提残渣 粗多糖 脂质抗氧化 油脂抗氧化 　　五味子为木兰科五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill的干燥成熟果实，是我国传统中草药，其味酸、甘，性温，归肺、心、肾经，具有保肝护肝、抗肿瘤、抗氧化和保护中枢神经系统等功效［1，2］。五味子中含有木脂素、多糖、挥发油等多种活性成分，但目前对五味子的利用主要是木脂素， 工业 生产中醇提木脂素后的残渣一般作为废物丢弃，造成药用资源的浪费。五味子多糖具有补肾养心、增强人体免疫等多方面的药理作用［3］，可开发为功能性食品及药品。有关五味子多糖的提取和药理活性的研究已有报道［1～3］，但未见五味子醇提残渣中多糖的研究报道，本文以五味子醇提残渣为原料提取粗多糖，并对其体外抗氧化活性进行研究，为五味子功能食品的研究开发提供基础，为中药五味子残渣资源的利用提供新途径。 　　 1 器材 　　1.1 材料与试剂 　　五味子醇提残渣由江苏中兴药业有限公司提供，经镇江市药检所陈黎主任药师鉴定为Schisandra chinensis果实残渣。普通级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购于江苏大学实验动物中心；氯化钠注射液（生理盐水）：吉林科伦康乃尔制药有限公司；猪油：新鲜猪板油熬制；金龙鱼大豆油：市售；医用乙醇（乙醇含量95%）；食品级BHT（2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚）：南京隆燕化工有限公司；其他试剂均为分析纯。 　　1.2 仪器与设备 　　METTLER AE240分析天平（上海梅特勒-拖利多仪器有限公司）；VIS-可见分光光度计（北京瑞利仪器公司）；101-1型不绣钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东跃进新 科学 仪器厂）；RE-52c型旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）；冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）；隔水式电热水浴箱（上海浦东跃进新科学仪器厂）；X-22R冷冻离心机（美国Beckman公司）；T8匀浆器（德国IKA公司）。 　　 2 方法 　　2.1 五味子醇提残渣粗多糖的制备称取适量五味子醇提残渣于1 000 ml烧瓶中，在100℃，固液比1∶14，时间3 h条件下，提取5次。合并提取液，加热浓缩至一定体积，加入医用乙醇使溶液中乙醇含量达80%，4℃冰箱中静置20 h，抽滤，沉淀挥尽醇味，复溶，冷冻干燥即得粗多糖。 　　2.2 多糖含量的测定多糖含量采用改良的硫酸-苯酚法测定（茆广华.银杏外种皮多糖的分离纯化及活性研究，2007）。 　　2.2.1 标准曲线绘制准确称取于105℃干燥至恒重的葡萄糖20 mg于100 ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容，准确吸取 7.5,10,12.5,15 ,17.5,20 ml分别置于6个25 ml容量瓶中，蒸馏水定容。从6个标准溶液中各吸取0.6 ml分别置于具塞比色管中，加入1.2 ml苯酚溶液，摇匀，再迅速滴加浓硫酸6.0 ml，摇匀后室温放置30 min；另以蒸馏水0.6 ml，同上操作，作为空白对照，于490 nm波长处测定吸收度A。 　　2.2.2 多糖含量测定精密称取五味子粗多糖30.0 mg，用蒸馏水于250 ml容量瓶中定容。吸取0.6 ml于试管中，同“2.2.1”项操作，测其吸光度，根据标准曲线 计算 粗多糖得率和多糖含量。 　　2.3 脂质过氧化 　　2.3.1 对H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响［4］小鼠摘眼球取血，制成抗凝血，4℃以3 000 r/min离心5 min得红细胞，用冰冷生理盐水洗3次，制成0.5%悬浮液。实验分对照组（生理盐水）和药物组（加相应浓度的五味子粗多糖）以及药物对照组（只加相应浓度的糖液以除去底色）。每组平行试管，各管加红细胞悬液1 ml，加入供试样品溶液0.2 ml，最后加100mmol/L H2O2 0.1 ml，混匀，于37℃水浴中反应1 h，用生理盐水稀释6倍，3 000 r/m