疟原虫的镜检技术–制片染色2016.pptVIP

薄血膜不同区域的红细胞疟原虫感染率有较大差别，通常血膜后端和边缘部疟原虫密度常比前半部或中央部高，所以，镜检时不宜只检查一个角落，应顺玻片的横轴检查。 镜检时，应当记录下所观察到的各种疟原虫，不要笼统地记作混合感染。 红细胞感染率计算法（薄血膜） 疟原虫密度=红细胞原虫感染率X红细胞数/微升血 红细胞原虫感染率（%）= 疟原虫数 ÷计数的红细胞数X 100 % 涂制薄血膜的同时，计数每微升血液中红细胞数，也可按男性500万个/微升血、女性450万个/微升血计算。 疟原虫密度较高时，检查1000个红细胞即可，密度低时，可按公式N=45.5 X （I－P）÷P计算需要检查的红细胞数。N为需要检查的红细胞数， P为1万个红细胞中的疟原虫数，I为血样单位（以1万个红细胞计算），45.5为常数。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 疟原虫镜检技术——制片与染色 主讲内容 厚薄血膜的制作与染色。 疟原虫计数方法。 血膜的制作（所需设备） 载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于洗涤剂溶液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2小时，再放入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦去血膜痕迹，清水漂洗干净，擦亮。 采血针：一次性 玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜 75%酒精棉球：采血前后消毒 记号笔：玻片上书写号码 血膜的制作（取血时间） 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。 发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状体之后的7-10天。 血膜的制作（取血操作） 在采集标本、制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。 取血部位和方法 耳垂或无名指（婴幼儿拇趾或足跟），通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅（1～2mm为宜）。然后用左手大拇指、食指和右手中指协同轻轻挤压出血滴。 用于检查疟原虫的血涂片有两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。 涂制厚、薄血膜的位置 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查。 标本片 发热病人血片 标签 厚血膜的制作 取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置,右手持推片，用推片的一角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜。 位置，位于玻片右1/3处（中央偏右或6等份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）。外观，圆形厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求，以1个油镜视野5-10个白细胞为宜。 薄血膜的制作 用推片一端边缘的中点从取血部位①刮取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片中线接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。注意：推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。也可载玻片平置在桌面上操作。 位置，位于玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部 ；外观，舌状厚薄均匀，无划痕；应在玻片上形成平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。 正确的推片姿势 标准的疟疾厚薄血膜位置 血膜的编号 血膜制成后，立即在玻片面上贴标签或写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序