第5章转录与转录后加工〔上〕.pptVIP

(三). RNA Polymerase III 启动子 tRNA　gene 5SrRNA gene 带颜色的区域为启动子 启动子在基因内部 tRNA : box A,box B +1 A box B box Conservative sequences in A box 5’- TGGN/NAGTGG is the of D loop of tRNA; B box 5’- GGTTCGAN/NCC is the T?C loop of tRNA. 5S rRNA : box A , box C a、5SrRNA是核糖体大亚单位的组成分，唯一独立分开转录的rRNA。 b、转录控制区boxC位于起始点下游80- 90bp处。 A box C box +1 关于真核生物RNA聚合酶、启动子和转录因子的说明： RNApol仅仅是一台转录机器，该机器何时、何处、何种速度转录DNA，取决于转录因子与DNA顺式作用元件（启动子和增强子）的相互作用对聚合酶的活化或抑制作用。 启动子不直接和RNA pol结合；需多种转录因子介入。 三 原核生物和真核生物转录启动子的异同 见教材 p163 第五章 转录与转录后加工 第一节 转录的基本原理 第二节 与转录起始和终止有关的DNA结构 第三节 原核生物和真核生物转录及抑制剂 第四节 转录后加工及其机制 第一节 转录的基本原理 一、与转录有关的几个概念 转录(transcription)：以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚合酶作用下进行RNA合成的起始、延长、终止等步骤。 转录的方向 5‘ 3’ E.coli在 0?C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37?C每秒就可加上40个核苷酸; 利用这个差别以14C来标记U,在0?C培养E.coli; 提取这种正在伸长的mRNA分子; 发现14C标记首先出现在伸长的3’端，因此可以证明合成是延着5’ 3’方向进行的。 怎样用实验证实mRNA的合成总是延着5’ 3’方向进行？ --转录的起始有关的序列称启动子，终止有关的序列称终止子.因此,启动子和终止子皆指DNA序列. --将作为转录模板的DNA单链称为模板链或反义链(antisense strand), 非模板链称为有义链（sense strand）或编码链。在体外,DNA的两条链都可作为RNA合成的模板。 尖头的方向代表基因编码链的方向 （1）转录时只有一条DNA链为模板，而复制时两条链都可作为模板； （2）DNA-RNA杂合双链不稳定，RNA合成后释放，而DNA复制叉形成后一直打开，新链和母链组成子链； （3）RNA合成不需引物，而DNA复制需引物； （4）转录的底物是rNTP，复制的底物是dNTP； （5）聚合酶系不同。 二、转录和复制的异同 三、原核和真核生物RNA聚合酶 1、原核生物RNA聚合酶 全酶Holoenzyme： β’，β，σ，α2 σ因子负责模板链的选择和转录的起始 RNA聚合酶 分布 合成的RNA 成熟的RNAs I 核仁 长的rRNA前体 28s,18s,5.8s rRNAs II 核质 hnRNAs snRNAs mRNAs,snRNAs Ⅲ 核质 5sRNA , tRNA前体 5sRNA , tRNA 2、真核生物RNA聚合酶 hnRNAs: 核不均一RNA 第一节 转录的基本特征 第二节 与转录起始和终止有关的DNA结构 第三节 mRNA的合成与加工 第四节 非编码RNA的合成与加工 第二节 与转录起始和终止有关的DNA结构 一、原核生物启动子和终止子 二、真核生物启动子 三、原核生物和真核生物转录 启动子的结构异同 基因可以以不同的效率表达。 如图:基因A的转录远远高于基因B. 为什么基因的表达效率会有不同? From Gene to protein From Gene to protein 启动子(promoter)指RNA聚合酶识别、结合并其始转录的一段具有高度保守性DNA序列。 关于上游和下游 5’ 3’ mRNA ＋1 上游 下游 一、原核生物启动子和终止子 +1: 第一个被转录的核苷酸 几个概念 RNA聚合酶与启动子的结合位点的鉴定 DNase 法 Foot printing法 硫酸二甲酯法 E.coli中不同的?因子可识别不同的启动子 （一）原核生物启动子的结构 典型原核生物启动子的结构 TTGACA TATAAT 16-19bp 5-9bp 转录起点 -35 -10 +1 示例 2. -10 序列 -10序列是位于-10bp左右的六核苷酸保守序列，A.T较丰富，是RNA聚合酶结合位点。 保守序列为 T