绿色植物中色素的提取及分离薄层色谱及柱色谱.ppt

色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一，它的分离效果比分馏、重结晶等一般的物理方法好，适用于少量和微量物质的分离。这一方法已在化学、生物学和医学中得到了普遍应用，广泛用于天然产物的分离和提纯。 吸附色谱是以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质从溶液中吸附到它的表面上；然后用溶剂洗脱或展开，利用不同物质在吸附剂和溶剂之间分布情况不同而得到分开。如柱色谱和薄层色谱。 分配色谱是利用混合物的组分在2种互不相溶的液体中分布情况不同而得到分离。这样的分离不经过吸附程序，仅由溶剂的萃取来完成，相当于一种连续性溶剂萃取方法。 薄层色谱 薄层色谱是一种微量、快速和简单的色谱方法，用于分离、纯化和鉴定有机化合物。优点是展开时间短、分离效率高和需要样品少(几微克)，特别适用于挥发性较小，或者在较高温底下易发生变化，不宜用气相色谱分离的化合物。 薄层色谱为固—液吸附色谱。样品是在薄层板上的吸附剂(固定相)和展开剂(流动相)之间进行分离。吸附剂对各种化合物的吸附能力不同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。 吸附剂 薄层色谱中常用的吸附剂是硅胶和氧化铝。其中硅胶分为硅胶G(含有煅石膏粘合剂)、硅胶H(不含粘合剂)、硅胶HF254(含荧光物质)。氧化铝也根据含粘合剂或荧光物质分为氧化铝G、氧化铝G F254、氧化铝HF254。 1：薄层板为什么要活化？ 2：在混合物的薄层色谱中，如何定性的判定各组分在薄层上的位置。 Rf值(比迁移值) 比迁移值是表示色谱图上斑点相对位置的一个数值。 各种物质的Rf值因其结构、吸附剂种类、展开剂、温度等不同而异。当上述条件固定时，对于一个物质来说比迁移值(Rf值)是一个特性常数，可以用来鉴别不同化合物，还可用于物质的分离和定量测定。 柱色谱 柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。如为无色物质，可用紫外光照射，收集会发出荧光的组分；否则就要采取分段收集洗提液，再分别进行鉴定。 吸附剂 常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。 溶剂 溶剂分为溶解样品的溶剂和洗脱剂。选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。通常是先将要分离的样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中。然后用稍大极性的溶剂使各组分在柱中形成若干谱带。再用极性更大的溶剂洗脱被吸附的物质。为了提高洗脱效果，有时也使用混合溶剂。 下页 退出 上页 * 下页 退出 上页 退出 * 上页 退出 绿色植物中色素的 提取和分离 (薄层色谱和柱色谱) 有机化学实验 返回 绿色植物中色素的提取和分离 实验目的 实验原理 试剂及仪器 实验步骤 注意事项 返回 一、实验目的 1.学习从植物中提取色素的方法。 2.学习薄层色谱(层析)和柱色谱(层析)的原理及其操作方法。 返回 二、实验原理 返回 叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素极性次序为何？ 提问 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。 通过柱色谱(层析)和薄层色谱(层析)对菠菜叶中的上述几种色素进行分离。 叶绿素a(R=CH3) 叶绿素b(R=CHO) β-胡萝卜素(R=H) 叶黄素(R=OH) 返回 色谱法分为吸附色谱和分配色谱2类 返回 返回 展开剂 薄层色谱的展开剂主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性来考虑。溶剂极性越大，对化合物的洗脱力也越大。薄层色谱的展开要在密闭的容器内进行。 返回 返回 提问 薄层色谱的展开 dA dS 溶质的最高浓度中心至原点中心的距离 溶剂前沿至原点中心的距离 返回 返回 柱色谱原理： 混合物 洗脱剂 返回 酸、碱醇、胺、硫醇酯、醛、酮 芳香族化合物卤代物、醚烯烃饱和烃 氧化铝对下列化合物的吸附性： 返回 溶剂的洗脱能力按下列次序递增： 石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、 氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、 甲醇、水、吡啶、乙酸。 返回 三、试剂及仪器 返回 硅胶G 中性氧化铝 (100～200目) 羧甲基纤维素 甲醇 石油醚(60～90℃) 丙酮 乙酸乙酯 无水硫酸钠 试剂： 仪器： 半微量有机合成玻璃仪器； 色谱柱； 层析缸； 旋转蒸发仪 四、实验步骤 返回 1. 菠菜色素的提取： 把新鲜菠菜洗净晾干或用滤纸吸干，