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Code No. RR925 研究用 Cycleave RT-PCR Influenza A (H1N1-2009) Virus Detection Kit 说明书 v201702Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 适用的 Real Time PCR 扩增仪 2 ● 探针标记 2 ● 扩增片段大小 2 ● 保 存 2 ● 原 理 2 ● RNA 样品制备 3 ● 注意事项 4 ● 实验操作 5 ● 结果判定 8 ● 制品说明 2009年4月25日，世界卫生组织首次向全球发出甲型H1N1流感疫情的通报，截至5月末，疫情迅速在墨西 哥、美国、加拿大等近50个国家蔓延，确诊病例逾万人，死亡病例近百人，引起了人类的高度重视。 2009年新型H1N1流感病毒属A型（甲型）流行性感冒病毒，含3种病毒的核酸序列，这3种病毒分别是猪 流感病毒、禽流感病毒、人类甲型流感病毒。 本制品是采用Cycling Probe法快速特异性检出2009年甲型H1N1流感病毒的Real Time RT-PCR试剂盒。 针对甲型流感病毒具有变异性强的特点，分别在2009年甲型H1N1流感病毒的NP基因、NA基因和HA基因 上设计特异性检测的Cycling Probe，以防止病毒突变而导致的假阴性结果。本试剂盒使用具有较强延伸 能力的PrimeScript RTase将病毒RNA反转录为cDNA，然后使用Hot Start DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS扩增cDNA，此步骤与Cycling Probe法相结合，灵敏度高、特异性好，可以对2009年甲型H1N1流感 病毒NP基因、NA基因和HA基因进行简单快速的实时检测。制品中病毒检测用的Cycling Probe使用了FAM 标记，内参照使用了ROX标记，可以进行两色荧光的双通道同步检测。对内参照反应的检测，可以用以 监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的发生。 制品中的DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制非特异性的PCR 扩增，大大提高了PCR的检测灵敏度。使用本试剂盒中的Positive Control RNA制作标准曲线，可以对低 至10 Copies的病毒进行定量分析