H3N2亚型犬流感病毒RT-PCR检测方法的建立.PDFVIP

第9 卷 第21 期 Vol.9 No.21 2016 年 11 月 November 2016 H3N2 亚型犬流感病毒 RT-PCR 检测方法的 建立 * * 王晨曦，王 倩 ，胡君宜，孙怡朋 （中国农业大学动物医学院，北京 100193 ） 摘要：为加强对H3N2 亚型犬流感病毒在犬群中流行情况的监测，设计了一对针对H3N2 亚型犬流感病毒血凝 素（hemagglutinin ，HA ）基因序列保守区域的引物，并建立了能够鉴别诊断H3N2 亚型犬流感病毒的反转录 PCR （reverse-transcriptase PCR ，RT-PCR ）方法。经过验证，建立的方法特异性好，仅能够特异性地检测出 1 H3N2 亚型犬流感病毒，与其他感染犬的流感病毒无交叉反应；该方法灵敏度高，最低检出量为1×10 TCID50/100 μL. 为评估其临床应用的潜能，分别用建立的RT-PCR 检测方法和传统的病毒分离方法检测了420 份犬的鼻咽拭子， 二者的阳性检出率完全一致。因此，本方法可作为H3N2 亚型犬流感病毒的临床诊断和流行病学调查快速实用 的检测工具。 关键词：家畜病毒学；犬流感病毒；H3N2 ；反转录PCR 中图分类号：S85 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2016)21-2260-05 Development of RT-PCR assay for detection of avian-origin H3N2 canine influenza viruses * WANG Chenxi, WANG Qian , HU Junyi, SUN Yipeng (College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China) Abstract: In order to strengthen the monitoring of avian-origin H3N2 canine influenza viruses, a pair of specific primers were designed according to the hemagglutinin (HA) genes conserved region of avian-origin H3N2 canine influenza viruses, and a reverse-transcriptase PCR (RT-PCR) assay was developed. The high specificity of this assay showed that there was no cross-reaction with other subtypes canine influenza viruses. This RT-PCR assay was also shown to have high sensitivity and the detection limit was 1×101 TCID50/100 μL. To a