一种提取高质量红树植物总RNA的有效方法.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（６）：８４８８ ? 一种提取高质量红树植物总ＲＮＡ的有效方法 １，２ １ ２ 陈宏林 　王　玺 　何振艳 （１沈阳农业大学农学院　沈阳　１１０１６１　２中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室　北京　１０００９３） 摘要　为了从富含单宁和多糖的红树植物中获得高质量的ＲＮＡ，在总结及改良前人工作的基础 上，优化了提取缓冲液的条件，采用碱性条件、ＰＶＰ及 巯基乙醇抑制单宁的氧化；利用ＲＮＡ与 β 单宁、多糖在不同浓度的２丁氧乙醇中溶解度不同的特性来去除单宁和多糖；同时利用ＬｉＣｌ来选 择性沉淀ＲＮＡ，获纯度较高的ＲＮＡ可以直接用于ｃＤＮＡ合成、ｃＤＮＡ文库的构建以及ＲＡＣＥ等分 子生物学操作。 关键词　秋茄　红海榄　榄李　红树植物　单宁　多糖　ＲＮＡ提取 中图分类号　Ｑ８１９ 　　红树林（Ｍａｎｇｒｏｖｅ）是分布于热带海岸潮间的木本 方法［９１２］，我们摸索出一种提取红树植物总ＲＮＡ的有 植物群落，具有海陆边缘生态系统的特点，是珍贵的物 效方法。用该方法提取出来的ＲＮＡ，可以直接用于合 种资源。随着现代江河流域工农业的迅猛发展和沿海 成ｃＤＮＡ，进行建库、ＲＡＣＥ等分子生物学操作。 城市人口与经济的快速增长，河口海湾区的环境污染 １　材料和方法 日趋严重。红树林对区域的污染具有较高承载力和耐 ［１］ 受性 。关于红树植物对重金属、有机污染物等的抗 １．１　材　料 性研究主要集中于污染物的富集以及生长、形态和生 １．１．１　植物材料　红树 （Ｍａｎｇｒｏｖｅ），包括秋茄 ［２６］ 理学方面 。 （Ｋａｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌ，Ｋｃ）、红海榄（Ｒｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａ，Ｒｓ）、 　　随着现代分子生物学的发展及其向各个学科的渗 榄李（Ｌｕｍｎｉｔｚｅｒａｒａｃｅｍｏｓａ，Ｌｒ）采自于福建省厦门市陨 透，人们对红树林这一独特珍贵资源的认识越来越多 湖，移栽于温室培养。取幼嫩叶片作为 ＲＮＡ提取 地使用分子水平技术。如采用等位酶和限制性内切酶 材料。 片段长度的多态性等手段研究红树植物种群的遗传变 １．１．２　 生化试剂　ＴＲＩＺＯＬ购于 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司； ［７８］ 异和生态分化问题 。但到目前为止．关于红树植物 ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅＫＩＤ购于ＴＲＡＮＳ公 Ⅱ 抗污染胁迫的分子机理方面的研究还极少有报道。在 司；ＤＥＰＣ、异硫氰酸胍、ＰＶＰ等购自上海生工；ＤｎａｓｅⅠ 分子水平探讨红树植物对重金属具较高耐受性的分子 、Ｒａｓｅ抑制剂、ＴａＫａＲａ３′ＦｕｌｌＲＡＣＥＣｏｒｅＳｅｔＶｅｒ．２．０ 生态机理，鉴定红树植物中高效的重金属结合物质及 Ｋｉｔ、ＴａＫａＲａ５′ＦｕｌｌＲＡＣＥＫｉｔ等购自大连宝生物工程 其调控基因．可以为可持续利用红树林资源提供更多 公司。 的依据，对保护