抗体偶联药物抗HER2单抗_MCC_DM1质控方法的建立_李萌.pdf

·22· 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2016,36(1) 生物检定 抗体偶联药物抗HER2 单抗-MCC-DM1 质控方法的建立* 李萌 于传飞 王文波 朱磊 刘春雨 张峰 陈伟 王兰** 高凯 王军志 ， ， ， ， ， ， ， ， ， （中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京100050 ） 摘要　目的：建立抗体偶联药物（ADC ）抗人表皮生长因子受体-2 （HER2 ）单抗- 马来酰亚胺基- 环己 烷-1- 羧化物（MCC ）- 美登素衍生物（DM1 ）（trastuzumab-DM1 ，T-DM1 ）的质控方法。方法：利用人 乳腺癌BT-474 细胞增殖抑制实验测定T-DM1 的生物学活性；利用生物分子间相互作用分析核心技术 （biomolecular interaction analysis core-technology ，BIAcore ）测定其结合常数（ ）；利用HER2 抗原和抗 KD DM1 抗体双夹心酶联免疫法（ELISA ）对T-DM1 进行鉴别；利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物 抗体偶联比（DAR ）；利用反相高效液相色谱（RP-HPLC ）法测定游离药物DM1 的含量；利用十二烷基磺 酸钠- 毛细管凝胶电泳（capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate ，CE-SDS ）和分子排阻色谱（size exclusion-high performance liquid chromatography ，SE-HPLC ）分析纯度；利用成像毛细管等点聚焦电泳 （iCIEF ）分析电荷异质性，其他各项指标均符合现行版中国药典的要求及其他相关要求。结果：T-DM1 生物学活性相对效价为（94.04 ±2.60 ）% ， 为（1.03 ±0.02 ）E-9 mol ·L-1 ，RSD 均小于5% ；ELISA 鉴别 KD 为阳性；液质联用法和紫外分光光度法测得的DAR 分别为3.21 及3.25；RP-HPLC 法测定游离药物DM1 的含量为（0.822 2 ±0.050 5 ）%，RSD 小于10%；非还原CE-SDS 主峰面积为（96.63 ±0.07 ）%，RSD 为 0.07% ；SE-HPLC 主峰面积为（97.65 ±0.005 8 ）% ，RSD 为0.005 8% ；iCIEF 分析可以将每个偶联数的抗 体药物分开，达到很好的鉴别。结论：建立ADC 中T-DM1 质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控 的特点，为我国ADC 的质量检测提供了参考依据。 关键词：抗体偶联药物（ADC ）；抗HER2 单抗-MCC-DM1 （T-DM1 ）；曲妥珠单抗；美登素；药物抗体偶 联比；生物学活性；酶联免疫（ELISA ）；鉴别；纯度测定 中图分类号：R 917　　　文献标识码：A　　　文章编号：0254-1793 （2016 ）01-0022-09 doi ：10.16155/j.0254-1793.2016.01.04 Development of methods for quality control of an anti-human * epidermal growth factor receptor-2-MCC-DM1 LI Meng ，YU Chuan-fei ，WANG Wen-bo ，ZHU Lei ，LIU Chun-yu ，ZHANG Feng ， ** CHEN Wei ，WANG Lan ，GAO Kai