改良果蝇唾液腺染色体制片法.doc

第 2卷 第 1期 太 原师 范学 院学 报 (自然科学版 ) V o l. 2 N o. 1 2003年 3月 JO U RN A L O F T A IY U AN T EAC HERS CO L LEG E ( Na tural Science Edition) M ar. 2003 改良果蝇唾液腺染色体制片法 赵惠玲 (太原师范学院 生物系 ,山西 太原 030001) 〔摘要〕 根据长期的教学实践 ,本文对果蝇唾液腺染色体玻片标本制作方法进行了改进.采用改进后的方法 ,能够使玻片标本的背景底色减弱甚至消失 ,染色体完整而清晰地呈现于视野中 ,实验成功率高 ,使果蝇唾液腺染色体制作与观察实验的教与学均达到满意的效果. 〔关键词〕 果蝇; 唾液腺染色体; 制片方法 〔文章编号〕 1672-2027( 2003) 01-0082-03 〔中图分类号〕 Q 96 〔文献标识码〕 A 果蝇唾液腺染色体的制作方法作为一个经典的基础实验出现在《遗传学实验》教材的每一种版本中 ,虽然该制片方法历史悠久 ,但仍有不足之处 ,主要表现在制作的玻片标本背景底色深重 ,影响了染色体的清晰度和观察效果. 作者通过多年的教学实践 ,改良了染色液 ,使用了冲洗液、背景净化液等新制剂和新步骤 ,使标本背景干净 ,染色体完整而清晰 ,更加易于观察 ,取得了良好的教学效果.并且通过学生亲自对实验方案的设计 ,提高了他们的实验能力和创造力. 1 方法与步骤 1. 1 溶液配制 1. 1. 1 醋酸铁矾苏木精染色液 [1 ] 储备液: A液: 2 g 苏木精溶于 100 m l 50% 的丙酸或冰醋酸中; B液: 0. 5 g 铁明矾溶于 100 m l 50% 的丙酸或冰醋酸中; 染色液: A液和 B液等量混合 ,在每 5 m l混合液中加入 2 g水合三氯乙醛 ,充分溶解摇匀. 1. 1. 2 背景净化液 30% 盐酸 40 ml、 45% 冰醋酸 50 ml、甘油 10 ml 按比例混合 . 1. 1. 3 冲洗液 50% 冰醋酸 98 m l、水合三氯乙醛 0. 2 g. 1. 1. 4 0. 65% 生理盐水. 1. 1. 5 1 mol 盐酸溶液 . 1. 1. 6 蓝化液 将 KO H(不拘量 )溶于无水酒精中 ,再将此液滴入另备的 70% 的酒精中 ,滴至 pH7. 5～ 8为止 . 1. 2 实验步骤 1. 2. 1 果蝇的采集 在夏秋季节 ,将香蕉、葡萄等水果放入广口瓶中 ,置树阴下或水果店 ,收集果蝇 . 1. 2. 2 培养基的制备 [2 ] 量取 100 m l水 ,加入 1 g 琼脂 ,煮沸溶解 ,加入红糖 10 g ,溶解后 ,加入 15 g 玉米面 ,不断地搅拌煮沸数分钟 ,成为稀粥状 ,加入数滴丙酸搅匀 ,再加入数滴酵母液 ,待凉后 ,再撒入一些干酵母 ,塞上棉花塞备用. 1. 2. 3 果蝇的培养 培养基瓶口向下 ,对准收集瓶口 ,果蝇飞入培养瓶后 ,迅速将棉塞塞好 ,放入 32℃ 恒温箱中培养 7天即  收稿日期: 2002-08-24 作者简介: 赵惠玲( 1963-) ,女 ,山西寿阳人 ,太原师范学院生物学实验师, 从事教学实验改革及生物制片的研究. 第 1期 赵惠玲: 改良果蝇唾液腺染色体制片法 83 可. 1. 2. 4 果蝇唾腺染色体的制作 取培养好的果蝇三龄幼虫放到载玻片上 ,加一滴生理盐水 ,将载玻片放到解剖镜下 ,用解剖针压住虫体的两端向外拉 ,即可拉出果蝇唾腺.于载玻片上滴加一滴 1 m ol盐酸 ,软化果蝇唾腺上的脂肪组织 ,用解剖针将其清除掉 ,再将盐酸及脂肪用蒸溜水冲洗干净后 ,用吸水纸将水吸去. 将背景净化液滴加到载玻片上 ,用镊子夹持载玻片 ,在酒精灯上微烤. 用冲洗液将背景净化液冲洗掉.滴染液于载玻片上 5 min～ 10 min后 ,用蓝化液将其冲洗 ,盖上盖片 ,指头适度用力按压 ,使细胞中染色体分散开 .将标本片经冰箱冰冻取出后 ,立即用手术刀片将盖玻片轻轻揭下 ,材料可能留在载片或盖片上 ,经过脱水和透明 ,用中性树脂胶封固. Nikon显微镜下观察、摄影. 2 结果 a.果蝇有四对染色体 ,其唾液腺染色体每对呈联会状态 ,其中两对着丝点在中间 ,形成 v 字状; 一对着丝粒在端部呈棒状;一对是点状染色体 .它们的着丝点聚在一起 ,染色较深 ,称为染色中心. 一个完整细胞而分散良好的唾腺染色体 ,在显微镜下能看到从染色中心伸出五个染色体头. (两对联会的 v 形染色体共形成四