根癌农杆菌介导深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因转化大豆及其转基因植株再生.pdf

药物生物技术 PhaⅢmceutical 2003，10(5)：273～277 273 Biotechnokw 根癌农杆菌介导深黄被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因 转化大豆及其转基因植株再生 h云萍，王广科，胡国武，孙红妍，任 勇，李航，李明春，邢来君 (南开大学微生物系，天津3【棚I) 摘要采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将深黄被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因导人大豆。 从发芽5—7 d的大豆儿菌卣切取了叶节外植体，经农杆菌浸染和共培养后，在含50-叫L卡那霉素的选择培养基 上培养2—4周后，从子叶节处诱导出抗忭不定芽。将不定芽转移到伸长培养基J二，4—6周后长至2～3cm高的 再牛苗。再将再生苗切下转人生根培养基，2～6周生根。生根后的再生植株经逐步锻炼移人花盆中，部分移栽 分析，证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组内并能遗传给后代。 关键词人豆；△6一脂肪酸脱氢酶基因；转基因植株；农杆菌介导法 中图分类号：08l 文献标识码：A 文章编号：1(肺-8915(2∞3)舾．0273．05 Y一亚麻酸(7．LjnolenicAcid’cLA)是一种f’八为AF306634)，该基因全长1374bp，编码457个氨 碳三烯全顺式不饱和脂肪酸，在碳链的第6，9，12基酸，这是国内外首次从深黄被孢霉分离到该基 位各有1个双键。它作为人体必需的不饱和脂肪 酸，对人体的激素调节及脂肪代谢发挥着重要的生 理作用，尤其它在心血管疾病、糖尿病以及癌症方 (M∞如m础㈣m∞．勋Ⅱ舡)中获得表达”1。这 面的医疗价值而成为学术界研究的热点”“。△6． 为将该基因转化到大豆中，提供了前提和基础。试 acid 脂肪酸脱氢酶(△6．fattyde蛆tIlIase，D6D)是验采用农杆菌介导的转化方法，将D6D基因转入 大豆中，获得了一批转化植株。 GLA生物合成的关键酶，它以亚油酸为底物，在c6 和c7位之间脱氢形成GLA，然后通过c链延长和 1材料和方法 脱氯作用进一步形成花生四烯酸，前列腺素类和白 1．1材料 三烯类牛物活性物质01。1993年Reddy等人，从产 1．1．1 大豆品种实验采用黑农37，种子由吉林 生GLA的单细胞蓝细菌(黝Ⅻ^D州括甲． Pcc6803)分离出D6D基因，并在另一株不产生省农科院大豆研究所提供。 1．1．2 GLA的蓝细菌(A∞6础m印．)中表达产生GLA“1。茵种年口质粒根癌农杆菌(^gr06耐酬m 1997年savanova等人从高等植物玻璃苣(勘仰 科学院微生物研究所方荣祥先生馈赠。含深黄被 。疗诂i枷i)中克隆了D6D基因并转人烟草中获得表 达“。1999年，Hnmg等人从高山被孢菌中克隆该 基因并在酿酒酵母中表达mJ。 实验室保存。 深黄被孢霉(MⅢ诂m如i出胧m)是一株可以 产生多烯不饱和脂肪酸的低等真菌，它可以产生 见文献[10]。 1．2方法 GLA。本实验室从高产GLA的深黄被孢霉M6．22 菌株中分离克隆出D6D的结构基因”1(GenB”k号 收稿日期：2002—12一10修回臼期：2003—a7_06 基金项日：天津市自然科学基金重点项目(项目编号013802511)和高等学校骨干教师资助计划项目 作者简介：卜|云萍，1971年生，女．博士．讲师。 通讯地址：天津市卫津路9