棉花黄萎病拮抗内生菌的筛选鉴定及抗菌物质研究.pdf

第 32 卷/ 第 5 期/ 河北师范大学学报/ 自然科学版/ Vol . 32 No . 5 2008 年 9 月 J OURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY/ Natural Science Edition/ Sep . 2008 棉花黄萎病拮抗内生菌的筛选鉴定及抗菌物质研究 张 　铎1 ,2 , 　谢 　莉1 ,2 , 　张 　蕾1 ,2 , 　张丽萍1 ,2 , 　赵宝华2 ( 1. 河北省科学院 生物研究所 ,河北 石家庄 　050081 ; 2 . 河北师范大学 生命科学学院 ,河北 石家庄 　0500 16) 摘 要 :从棉株中分离筛选到一株对棉花黄萎病菌具有较强拮抗作用的内生细菌 B SD2 . 通过形态特征 、生理 生化特性以及 16 S rDNA 碱基序列测定和同源性分析 ,鉴定其为枯草芽孢杆菌. 平板对峙试验表明 ,B SD2对多种植 物病原真菌有抑制作用. B SD2培养液以50 %硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液 ,具有 良好的热稳定性和酸碱稳定 性 ,对胰蛋白酶 、蛋白酶 K 和胃蛋白酶均不敏感 ,对氯仿敏感 ,能够有效抑制黄萎病菌孢子萌发. 关键词 :棉花黄萎病 ; 枯草芽孢杆菌 ; 鉴定 ; 抗菌蛋白 中图分类号 :S 435 . 62 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2008) ( ) [ 1～3 ] 由大丽轮枝菌 Vert icil l i u m dahil ae Kleb . 引起的棉花黄萎病是一种危害严重的世界性病害 . 棉花 黄萎病属于土传病害 ,分布广 、危害重 、传播途径多、存活时间久 , 因此难于防治[4 ,5 ] . 在寻求安全有效的防治 措施过程中 ,生物防治日益引起人们的关注. 植物内生细菌是生活在健康植物的各种组织和器官内部的细胞 间隙或细胞内,并与寄主植物建立起和谐联合关系的一类微生物[6 ] . 与其他生防菌相比, 内生细菌在植株体 内具有稳定的生存空间 ,不易受外界环境的影响 ,在植物体内定殖 、传导 ,通过营养和位点竞争 ,产生抗菌物 ( ) 质 ,诱导系统抗性 induced systemic resist ance , ISR 等作用机制有效抑制病原菌的侵染或提高植株抗病性 , 有的还同时具有促进植物生长的作用 ,其独具优势的特性使其成为植物病害生物防治的一类极具应用潜能 的新的资源菌[7～9 ] . 国内外已有内生细菌用于马铃薯 、水稻 、棉花 、玉米以及蔬菜和水果产后病害防治的报 道[ 10～12 ] . 因此本研究从棉花中分离和筛选出拮抗大丽轮枝菌的内生细菌 ,对该菌进行鉴定 ,并对其胞外代 谢产物进行初步研究 ,为防治棉花黄萎病提供新的生防资源. 1 　材料与方法 1. 1 　材 　料 1. 1. 1 　菌 　种 α ( 供试指示菌棉花黄萎病菌由笔者所在实验室从土壤中分离获得 ,大肠杆菌 D H5 、棉花枯萎病 Fus ari u m oxysp or u m f . sp . v as i nf ect u m) 、番茄灰霉病菌 ( B ot ry t is ci nerea) 、苹果轮纹病菌 ( Phys alosp ora p i ricol a) 、 ( ) (