植科-分生-第二章-第二讲.pdf

Molecular Biology 主讲教师：王幼宁 副教授 youningwang@mail.hzau.edu.cn 课前提问 No. 1：RNA可以传递遗传信息吗？  烟草花叶病毒（TMV）:烟草花叶病毒的遗传物质是RNA, 所以病毒在增殖时先反转录成DNA,然后通过DNA的转录翻译 等步骤生成相应的RNA和蛋白质外壳,然后组装成为烟草花叶 病毒。  脊髓灰白质炎病毒、脑炎病毒 No. 2：是否存在核酸之外的其他遗传物 质？ 羊痒疫（Scripie） 人类kuru病 牛海绵状脑炎（疯牛病） 28kD的疏水性糖蛋白 由核基因组基因编码 PrP （Prion Protein） 朊病毒 传染性海绵状脑病 没有分离到病毒和细菌， 可被蛋白酶K抑制 只分离到高度纯化的病 不被核酸酶和辐射灭活 体脑组织的感染性粒子 不含大于100nt的核酸 朊是蛋白质的旧称，朊病毒意思就是蛋白质病毒，朊病毒 （prion virus）严格来说不是病毒，是一类不含核酸而仅由 蛋白质构成的可自我复制并具感染性的因子。 严格来说，朊病毒由于没有DNA或RNA，并不能进行自我复制。 它的复制方式是：朊病毒 （SC型PrP型蛋白）在分子伴侣的辅 助下，接触到了生物体内正常的C型PrP蛋白，导致C型的变成 了SC型。 No.3：DNA都是双链?RNA都是单链吗? • 有的DNA为单链：如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13， SEN病毒。 • 某些噬菌体中也存在双链RNA。 • 呼肠孤病毒(Re-ovirus),奥尔比病毒,葡萄卷叶病病 毒是“双链RNA”病毒。 •microRNA,双链RNA,行使的是调控基因时序性表达。 No.4：如何鉴别DNA是双链还是单链？ 1.跑琼脂糖胶，用SYBR Green染色，SYBR Green可以插入双链 DNA中，进而染色，单链DNA则染不上。 2.如果知道DNA长度,跑胶也可以分辨出来,双链的大小约是单链 的2倍。 ？？？ DNA的变性与复性 DNA的变性 DNA的变性 变性 （Denaturation） ：由双链DNA （D.S.DNA） 变成单链DNA (S.S.DNA）的过程叫变性， 也叫解链 （melting)。 • 本质：氢键和疏水键断裂 • 部分的或全部的 • 可逆的或非可逆的 • 不涉及一级结构的改变 • 双链DNA,RNA双链区,DNA:RNA杂种双链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex) 都具有此性质。 导致DNA变性的因素 •高温 •极端pH值 •尿素 变性剂：把能使DNA发生变 性的化学试剂叫变性剂。 •甲酰胺 变性原理：变性是热处理或变性剂处理的条件下,直接 或间接的打断DNA中的H键，这时双链DNA就 会逐渐变成单链。 氢键断裂、或氢键的形成关系发生改变、或碱基间的堆积力受 到破坏，都会导致变性。 碱变性：把由碱引起的变性叫碱变性； 热变性：由热引起的变性叫热变性，属于物理变性。 热变性是常用的DNA变性方法之一，因为它方法简单、 容易控制，不改变DNA溶液的化学成分，更重要的是 它能有效的使DNA发生变性。 DNA变性后其物理、化学性质发生的变化 （1）生物功能丧失或改变； （2）增色效应(hyperchromic effect)； 指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应。DNA分子中碱基间电子的