不同氮、磷浓度对微藻生长代谢影响.docVIP

不同氮、磷浓度对微藻生长代谢的影响 1 目的与意义 扁藻Tetraselmis Chui）隶属于绿藻门、绿藻纲、团藻目、衣藻科扁藻作为海产品幼体前期的优质植物性饵料，对海产品幼体的生长发育有着极其重要的作用。对所投喂的动物性饵料，如轮虫、裸腹蛋、丰年虫等起着良好的同步强化作用；通过扁藻的光合作用，能降低并消除育苗水体的有机污染和其他有害物质，并为水体提供充足的氧气，保持养殖生态系统的良性循环，达到改善水质目的。因此本文对微绿球藻对N和P营养盐需求的研究以期为今后微藻生态调控防病技术的研究应用提供资料。Tetraselmis Chui）、盐藻（Dunaliella salina） 2.2 实验设计 2.2.1不同盐度对微藻生长特性及氮、磷利用的影响 实验所用海水取自近海海域，经过棉花粗滤、0.45pm醋酸纤维滤膜过滤，120℃高温灭菌20min后使用。自然海水中加入NCaI或蒸馏水，设置盐度梯度为10、25、40、55、70，原始海水的盐度为33。实验培养基为：NaHCO33.0g/L、NaNO31.0g/L、KH2PO40.025g/L、f/2微量元素lmL、f/2维生素lmL。 用250mL的锥形瓶，取处于对数生长期的藻种接种，置于光照摇床进行一次性培养，培养温度20±1℃，摇床转速100rpm，光照强度2500-3500lx(1.0mW/cm2=46mmol/(m2S)=25001x)，持续光照培养。 培养过程中每天定时测定藻的光密度OD、细胞生长速率K，培养结束后测定藻体中各种生化成分如叶绿素a、多糖、蛋白质的积累情况，并测定培养液中硝态氮和无机磷的剩余量以考察微藻在不同盐度下对氮磷的利用情况。 2.2.2不同氮、磷浓度对微藻生长特性及氮、磷利用的影响 （1）氮浓度比较实验 NaNO3加入量分别设置为0（无N组）、0.1、0.4、0.8、1.2g/L，其他培养基成分为NaHCO33.0g/L、KH2PO40.025g/L、f/2微量元素lmL、f/2维生素lmL，用250mL的锥形瓶，取处于对数生长期的藻种接种，置于光照摇床进行一次性培养，培养温度20±1℃，摇床转速100rpm，光照强度2500-3500lx(1.0mW/cm2=46mmol/(m2S)=25001x)，持续光照培养。 培养过程中每天定时测定藻的光密度OD、细胞生长速率K，培养结束后测定藻体中各种生化成分如叶绿素a、多糖、蛋白质的积累情况。 （2）磷浓度比较实验 KH2PO4加入量分别设置为0(无P组)、0.015、0.03、0.045、0.06g/L，其他培养基成分为NaHCO33.0g/L、NaNO31.0g/L、f/2微量元素lmL、f/2维生素lmL，同上培养。 （3）无氮磷营养盐实验 培养基成分为NaHCO33.0g/L、f/2微量元素lmL、f/2维生素lmL，同上培养。 2.2.3 不同氮磷比对微藻生长特性及氮、磷利用的影响 以NaNO3为氮源，加入NaNO3使浓度依次为0.05、0.2、0.5、0.8、1.0g/L，以KH2PO4为磷源，加入KH2PO4使浓度依次为0.06、0.06、0.04、0.007、0.008g/L，设置N:P比分别为l:l、4:l、16:l、80:1、160:1，同上培养。 2.2.4 不同氮化合态比例对微藻生长特性及氮、磷利用的影响 按总NH4+-N、NO3--N所占比例不同分为5个处理，分别为NH4+-N:NO3—N=10:1，3:1，1:1，1:3和1:10，实验培养基为：NaHCO33.0g/L、NaNO31.0g/L、KH2PO40.025g/L、f/2微量元素lmL、f/2维生素lmL。 2.3 指标的测定及方法 2.3.1 藻体计数 用三角烧瓶培养高浓度的扁藻、盐藻藻液（约3000×104cells. mL-1），稀释成一定的浓度梯度后用分光光度计(680nm、700nm) 测定光密度值，将藻液用血球计数板计算其细胞数680nm、700nm）测出各锥形瓶中的相应的藻细胞浓度，以不加藻种的相同培养液为空白。率=(lnX2-lnX1)/T，X2表示T天后的藻密度X1表示藻密度个/mlT表示时间