Beclin1进化保守区_SA融_省略_靶向系统及其对前列腺癌细胞的抑制_高萌.pdf

中国肿瘤生物治疗杂志 http :/ /www． biother． org Chin J Cancer Biother ，Apr． 2016 ，Vol． 23 ，No． 2 1·61 · · · DOI :10． 3872 /j． issn． 1007-385X． 2016． 02． 002 研究快报 Beclin1 进化保守区- SA 融合蛋白偶联生物素- A10 适配子制备 PSMA 靶向 系统及其对前列腺癌细胞的抑制 ， ， ， ， ， ， ， ( 高萌 刘家云 马越云 李蕊 李卓 苏明权 唐海斌 郝晓柯 第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究 ， 710032) 所 陕西西安 ［ ］ 目的: (streptavidin ，SA) Beclin1 (evolutionary conserved district ，ECD) 摘 要 构建链霉亲和素 与 进化保守区 融合蛋白原 ， - (prostate specific membrane antigen ，PSMA) A10 核表达载体 将融合蛋白与生物素 前列腺特异性膜抗原 特异性适配子 偶联制 + PSMA ， PSMA 。方法: SA-ECD ， 备 靶向系统 鉴定其促进 前列腺癌细胞凋亡及自噬的功能 采用基因合成技术获得融合基因 克 PUC57 ， PET30a ，IPTG ， 隆至 载体鉴定无误后 再将其定向插入原核表达载体 诱导融合蛋白表达 镍亲和凝胶层析柱纯化融合 ，Western blotting 。 -A10∶ SA-ECD 4∶ 1 PSMA ， 蛋白 鉴定 按照生物素 摩尔比为 的比例制备 特异性的偶联物即靶向系统 凝胶迁移 (electrophoretic mobility shift assay ，EMSA) SA-ECD ， 、Western blotting 、 阻滞实验 验证 与生物素的结合 流式细胞术 锥虫蓝染色 、 。结果: 分别检测靶向系统对前列腺癌细胞凋亡 自噬相关蛋白表达和细胞活力的影响 双酶切及基因测序证实重组质粒 P