Biolog GN2 微生物鉴定微孔板使用手册.pdf

Biolog GN2 微生物鉴定板使用手册 用途 GN2鉴定板提供了标准化的95种反应用于鉴定一大类肠道菌、非肠道菌和苛生菌等革兰氏阴性好氧细菌。 Biolog 的MicroLog1 、MicroLog 2 、MicroLog 3或OmniLog软件根据GN2鉴定板的代谢模式对该种微生物进行鉴 定。 描述 Biolog鉴定板检测微生物利用或氧化预先选择好的不同碳源的能力。该检测产生了紫色孔的特征模式，进 而构成了微生物利用不同碳源的代谢指纹。所有必需的营养物质和生化试剂都预先加入并冻干在各个孔内， 四唑紫作为氧化还原染料在颜色上指示微生物对碳源利用的情况。整个鉴定过程非常简单。需要鉴定的菌株 在固体培养基上生长，然后在推荐的浓度下用特殊的接种液制成菌悬液。菌悬液以每孔150µl接种到鉴定板上， 接种的时候所有的孔都是无色的。在培养期间，在一些孔（阳性孔）里微生物利用相应的碳源进行代谢，而 显色物质会被还原成紫色。阴性孔和对照孔（A-1 ：不含碳源）保持无色。鉴定板培养4-6个小时和/或16-24个 小时，让微生物充分的利用碳源，以形成稳定的碳源代谢指纹。软件自动将鉴定板的数据和数据库进行对比， 得出和数据库中最相似的菌株名称。 注意事项 为了得到准确和可重复性的结果，务必注意下列事项。 1. 所要进行鉴定的微生物必须是纯种，此系统不是为在混合菌群中鉴定单一菌种而设计的。 2. 在鉴定之前，选择合适的培养基和进行适量的传代培养是非常重要的。在接种之前，许多菌种会因为培 养条件的不同而产生不同的代谢模式。 3. 在操作过程中必须使用无菌器材和进行无菌操作，杂菌的污染会干扰结果。 4. 大多数消耗品为一次使用，重复使用的如试管，移液器枪头必须把去污剂清洗干净，残留的清洁剂会影 响鉴定结果。 5. 在将菌悬液接种到鉴定板之前，应把鉴定板拿出冰箱，让鉴定板恢复到常温。因为有些菌种（如Neisseria ） 对温度的快速变化很敏感。 6. 仔细校正浊度计，接种菌悬液的浊度应在规定的范围内。 7. 鉴定板中包含多种对温度和光照敏感的物质，如果个别孔出现棕黑色，说明碳源已经被降解。有时候， 在保质期内或超过保质期不长的时间里，个别孔会出现黄色或粉红色，这是正常的。 8. Biolog是基于测试活菌的代谢特性。一些菌即使在很短的时间里遭受温度、pH值和渗透压的压力也会丧失 代谢活性。所以为了获得良好的鉴定结果必须确保菌种为活菌，操作要小心。 9. 为了延长鉴定板的保质期限，应在2-8 ℃的条件下避光保存，鉴定板的过期时间打印在EXP.后面。 所需器材和消耗品 BUG培养基、接种液、巯基乙酸钠、长棉签、接种棒、储液槽、八道移液器、移液器头、浊度仪、浊度 标准品、控温培养箱和相应的鉴定板。其中接种液、巯基乙酸钠、水杨酸钠可由用户自行配制，移液器头、 接种棒、储液槽可选用国产品牌代替。在使用鉴定板和接种液之前都应该使其温度恢复到25 ℃。 鉴定步骤 第一步： 用户可以用自己配制的琼脂培养基对需要鉴定的菌株进行分离纯化，为了保证纯化的效果，最好进行两 次以上的划线分离，取单菌落纯化。如果菌株为冻干或冷冻样品，需要传代培养2-3代，让菌株恢复活力。 第二步： 对纯化好的菌株做革兰氏染色，确定菌株是否是革兰氏阴性。观察菌落外部形态或用显微镜观察菌株形 态，确定是球菌还是杆菌。 如果是革兰氏阴性菌，还需要最终确认是肠道菌(GN-ENT)、非肠道菌(GN-NENT)或苛生菌(GN-FAS) 。方 法是，氧化酶阳性或氧化酶阴性但三糖铁实验为K/K或K/Aw ，则该菌株为非肠道菌(GN-NENT)，培养温度通 常是30℃；氧化酶阴性以及三糖铁实验为A/A或K/A ，则该菌株为肠道菌(GN-ENT)，培养温度通常是35-37℃。 如果菌株：①需要在巧克力培养基上或需要6.5% CO 培养，②在BUG+B培养基上生长非常差，形成针尖大小 2 的菌落，那么可以认为这些菌是苛生菌(GN-FAS) 。大多数苛生菌都是从哺乳动物的呼吸道里分离出来的，如 Actinobacillus 、Alysiella 、Brucella 、Capnocytophaga、CDC Group DF-3、CDC Group EF-4、Eikenella,Haemophilus 、 Kingella 、Moraxella 、Neisseria 、Simonsiella 、Suttonella和Taylor